Abstrakt
Ligustrum vicaryi L. je hybridní Ligustrum ovalifolium Hassk. Vary. aureo-marginatum a Ligustrum vulgale L., patřící do čeledi Oleaceae. Díky svým zlatým listům se často používá jako okrasný keř. Jeho lékařská hodnota však ještě není objevena. V poslední době přitahují rostlinné polysacharidy komplexní pozornost díky svým biologickým vlastnostem, včetně imunomodulačních a antioxidačních aktivit. Cílem této studie bylo extrahovat, očistit a charakterizovat polysacharid z ovoce Ligustrum vicaryi L. a zkoumat jeho imunomodulační a antioxidační aktivity. Polysacharid ovoce Ligustrum vicaryi L. (LVFP) byl získán ultrazvukovou extrakcí, srážením ethanolu, separací makroporézní pryskyřice a čištěním dialyzačního vaku. Fyzikálně-chemické vlastnosti LVFP byly objasněny pomocí Fourier-transformace infračervené spektrometrie, vysoce výkonné iontové chromatografie a vysokoúčinná gelová filtrační chromatografie. Výsledky ukázaly, že LVFP se skládala z rhamnóza, arabinóza, galaktóza a glukóza v poměru 1.79 : 7.55 : 4.58 : 1.54, a jeho molekulární hmotnost byla 88,949 Da. Imunomodulační a antioxidační aktivity LVFP byly zkoumány pomocí cyklofosfamidem (Cy-) indukované imunosuprimovaným myším modelu. Výsledky prokázaly, že LVFP výrazně zvýšená sleziny a brzlíku indexy, zvýšená fagocytární funkce neutrofilů, aktivované B a T lymfocyty, a upregulated sérové hladiny IL-10 a TNF-α. Navíc jsme pozorovali, že LVFP zmírnil poškození jater vyvolané Cy zvýšením hladin superoxiddismutázy (SOD) a glutathionperoxidázy (GSH-px). Tyto výsledky naznačily, že LVFP má imunomodulační a antioxidační aktivity, tedy položení základů pro aplikaci LVFP ve farmaceutickém a funkční potraviny průmyslu.
1. Úvod
Imunomodulátory mohou být použity jako preventivní nebo terapeutické strategie, posílení nebo potlačení obranné reakce hostitele. Přírodní produkty s imunomodulačními a antioxidačními funkcemi se široce používají k léčbě několika nemocí, včetně autoimunitních onemocnění, zánětlivých poruch a rakoviny . V poslední době roste zájem o levné a méně toxické přírodní produkty nad použitím syntetických chemoterapeutických látek.
Ligustrum vicaryi L. je kříženec Ligustrum ovalifolium Hassk. Vary. aureo-marginatum a Ligustrum vulgale L., patřící do čeledi Oleaceae . Představuje fenotyp bez chlorofylu a díky svým zlatým listům je široce používán jako zahradnický keř. Podle charakteristik výměny plynů a fluorescenčních reakcí chlorofylu může Ligustrum vicaryi L. odolávat SO2, a proto může být použit pro fytostabilizaci půdy kontaminované Cd . Přestože Ligustrum vicaryi L. má vysokou okrasnou hodnotu a hodnotu ochrany životního prostředí, jeho terapeutický potenciál ještě není objasněn.
Rostlinné polysacharidy, třída důležité biologické makromolekuly, která se běžně nachází v tradičních léčivých bylin, vykazují řadu biologických aktivit, včetně antioxidační, imunomodulační, antiaging, protinádorové a anti-zánětlivé aktivity . V posledních letech bylo provedeno mnoho studií věnovaných extrakci a analýze bioaktivity rostlinných polysacharidů. Polysacharidy rostlinných plodů jsou nejčastěji zkoumány, včetně polysacharidů jujube, tomel polysacharidů a melounových polysacharidů . Pokud je nám známo, studie založená na přípravě a bioaktivitě polysacharidů Ligustrum vicaryi L. fruit (LVFPs) nebyla hlášena.
v této studii byl LVFP extrahován a čištěn. Dále byla analyzována molekulová hmotnost a monosacharidové složení LVFP. Kromě toho byly biologické funkce LVFP hodnoceny v imunosupresivním myším modelu indukovaném cyklofosfamidem (Cy). Výsledky prokázaly, že LVFP má imunomodulační schopnost aktivací vrozené i adaptivní imunity. Kromě toho LVFP prokázal antioxidační aktivitu zvýšením superoxiddismutázy (SOD) a glutathionperoxidázy (GSH-px). Tato studie představila teoretický základ pro vývoj LVFP jako alternativního terapeutického prostředku pro onemocnění související s imunitou.
2. Materiály a metody
2.1. Dobré životní podmínky zvířat a Etických Prohlášení
Všechny experimentální postupy v souladu s doporučeními DORAZÍ (výzkum na zvířatech: reporting in vivo experimenty) pokyny . Ústavní Výbor pro péči o zvířata a použití Jining Medical University tyto postupy schválil. Všechny experimentální postupy byly prováděny co nejlidštěji. Celkem 100 zdravých samců Kunming myší o hmotnosti 20-25 g bylo umístěno v podmínkách udržujících 12 hodin umělého cyklu tmavého světla s dostupným jídlem a vodou ad libitum. Zvířata byla umístěna ve standardních zvířecích místnostech s teplotou 20-22°C a vlhkostí 55-60%.
2.2. Extrakce a čištění polysacharidu
Ligustrum vicaryi L. plody byly získány z botanické zahrady Jining Medical University (Rizhao, Shandong, Čína) a identifikovány Jianan Wang (lékařský botanik, School of Pharmacy, Jining Medical University). Sušené plody Ligustrum vicaryi L. byly rozdrceny a proseté sítem o velikosti 40 ok. Prášek byl ponořen do acetonu (poměr prášku k acetonu byl 1: 3) a protřepáván po dobu 24 hodin, aby se odstranily lipidy. Supernatant byl zlikvidován a zbytky byly vysušeny v peci. Polysacharid se extrahuje destilovanou vodou 8: 1 (v/w) při 50°C po dobu 80 minut za použití ultrazvukového výkonu 250 W. Vodní extrakt byl filtrován pomocí bavlny. Zbytek byl odstraněn po centrifugaci při 3000 ot / min po dobu 3 min. Dále se koncentrovaný supernatant vysráží 70% ethanolem a tento proces se opakuje s 95% ethanolem. Po odstranění supernatantu se k rozpuštění extraktu přidá destilovaná voda a zbytek se odstraní centrifugací. K odstranění pigmentu byla použita makroporézní pryskyřice DM101. Sevage činidlo (chloroform / 1-butanol, v / v = 4 : 1) byl použit k odstranění proteinu, dokud nebyla pozorována žádná změna barvy pomocí detekce Coomassie Brilliant Blue G-250. Polysacharidy byly umístěny do mrazicí sušičky po dobu 24 hodin, aby se získal zmrazený prášek. Malé molekuly polysacharidů byly odstraněny pomocí dialýzy taška (molekulární cutoff 3500 Da) za dva dny, a destilované vody byl nahrazen každých 12 h. Sloupec chromatografie Sephadex G-200 byl použit k čištění LVFP. Pro stanovení čistoty LVFP byl použit test kyseliny anthron-sírové se standardní křivkou glukózy.
2.3. Fourier-Transform Infrared (FTIR) Analýza
LVFP byl smíchán s čistou bromid draselný prášek, a směs byla umístěna v achátové třecí misce a půdu rovnoměrně pod infračervenou lampou. Směs byla hodnocena pomocí Fourierova transformačního infračerveného spektrometru IRTracer-100 (Shimadzu, Japonsko).
2.4. Vysoce výkonná iontová chromatografie (HPIC)
pro analýzu HPIC bylo 5 mg LVFP rozpuštěno v 1 mL kyseliny 2 mol/L trifluoroctové a umístěno při teplotě 121°C po dobu 2 h pro hydrolýzu. Poté byla směs filtrována pomocí mikroporézní filtrační membrány o velikosti 0,45 µm. Chromatografické separace monosacharidů byla provedena na ICS-5000 iontový chromatograf s CarboPac PA20 sloupec a pulzní proud detektoru. Iontové chromatografie separační podmínky byly upraveny a testovány pro směs osmi monosacharidů normy (fucose, rhamnóza, arabinóza, galaktóza, glukóza, xylosa, mannosa, fruktosa). Vynikající separace byla získána gradientní eluzí s konstantním průtokem 0,5 mL / min. Mobilní fáze sestávala z 250 mM NaOH (a), vody (obsahující 1 M NAAC%, v/v, B) a vody (C). Eluce byla provedena následovně: 2.0% 0∼21 min; 2.0% a 5,0%, B na 21.1 min; 2.0% a a 20% B na 21.1∼30 min; 80% na 30.1∼50 min.
2.5. High-Výkon Gelové Filtrační Chromatografie (HPGFC)
polysacharid molekulová hmotnost byla analyzována pomocí HPGFC (Waters, New York, USA) a vybaveny RID (2414 refractive index detector) a Zmocnit 3 pracovní stanice. Chromatografické podmínky byly následující: chromatografická kolona: Ultrahydrogel™ Lineární, 300 mm × 7,8 mm × 2, mobilní fáze: 0,1 M NaNO3, průtok: 0.9 mL/min a teplota kolony: 45°C. Vzorek byl rozpuštěn v kapalné fázi a filtrován mikroporézní filtrační membránou. Standardy molekulové hmotnosti použité pro kalibrační křivku byly MW135350, MW36800, MW9750, MW2700 a MW180.
2.6. Cyklofosfamid- (Cy-) Indukované Imunosupresivní Myš Model a LVFP Správy
celkem 100 myši byly náhodně rozděleny do pěti skupin: kontrolní, Cy, Cy + LVFP (100 mg/kg/den), Cy + LVFP (200 mg/kg/den) a Cy + LVFP (400 mg/kg/den). Kontrolní skupině byl podáván normální fyziologický roztok a další čtyři skupiny byly intraperitoneálně injikovány Cy (40 mg/kg) každý den po dobu sedmi dnů. LVFP byl podáván intragastrickým podáním po dobu sedmi po sobě jdoucích dnů.
2.7. Stanovení indexů sleziny a brzlíku
všechny myši byly zváženy a obětovány 24 hodin po posledním podání léku. Slezina a brzlík byly vyříznuty a zváženy. Index sleziny nebo brzlíku byl vyjádřen jako poměr hmotnosti sleziny nebo brzlíku k tělesné hmotnosti.
2.8. Stanovení fagocytární funkce myších neutrofilů
Staphylococcus aureus bylo použito k posouzení fagocytózy neutrofilů. Stručně řečeno, 40 µL krve bylo získáno z myší po podání LVFP a umístěno do heparinové zkumavky, aby se zabránilo koagulaci. Dále bylo do výše uvedené zkumavky přidáno 40 µL bakteriální suspenze. Směs byla rovnoměrně potažené na sklíčka a udržuje se při teplotě místnosti po dobu 0,5 h. Pak směs byla stanovena s 2-3 kapek methanolu po dobu 5 min a potřísněné 4-5 kapek Wright stain pro 5 min. Bylo pozorováno a zaznamenáno celkem 100 neutrofilů. Neutrofilní fagocytózy sazby a počtu neutrofilů fagocytární index se vypočítá takto: neutrofilní fagocytózy rate = počet neutrofilů, která se zobrazí fagocytární funkce/celkový počet neutrofilů a neutrofilů fagocytární index = celkový počet bakterií, který byl pohlcen neutrofilů/celkový počet neutrofilů.
2.9. Stanovení Sérových Hemolyzinový ELISA
Na čtvrtý den, 5% kuřecí červených krvinek (CRBC) suspenze byla intraperitoneálně vstříkne do myší (0,1 mL/10 g). Sedmý den, 2 hodiny po podání LVFP, byl získán 1 mL myší krve a centrifugován po dobu 10 minut. Poté bylo do 2 mL normálního fyziologického roztoku přidáno 40 µL séra. Jeden mL 10% séra morčat a 1 mL 5% CRBC suspenze byl přidán do séra, následuje inkubace ve vodní lázni při 37°C po dobu 0,5 h. Směs byla centrifugována a supernatant byl umístěn v 96-well kultivační destičky. Odpovídající hodnota optické hustoty byla zjištěna pomocí nástroje Thermo Scientific Multiskan MK3 Enzyme Mark (Waltham, MA, USA).
2.10. Stanovení rychlosti transformace T lymfocytů
druhý den byly myším intramuskulárně injikovány 8 mg / kg fytohemaglutininu (PHA). Sedmý den, 2 hodiny po podání LVFP, bylo z retroorbitálního sinu odebráno 40 µL krve, umístěno na sklíčko a obarveno 4-5 kapkami Wrightovy skvrny. Přebytečné barvivo bylo po 20 minutách opláchnuto vodou. Pomocí mikroskopu bylo pozorováno 100 buněk. Transformované lymfocyty byly vypočteny následovně: rychlost transformace lymfocytů = transformované lymfocyty / celkový počet lymfocytů.
2.11. Odpověď hypersenzitivity opožděného typu (DTH)
DTH odpověď byla zkoumána stupněm otoku ucha. Obecně se předpokládá, že stupeň otoku ucha odráží stupeň zánětu . DTH reakce byla měřena takto: Na druhý den, 1 cm2 břišní vlasy byl odstraněn pomocí Na2S a břišní kůže byla pokryta s 25 µL 1-fluoro-2,4-dinitrobenzen (DNFB) řešení. Šestý den byla kůže na pravém uchu potažena 20 µL roztoku DNFB. Sedmý den, 2 hodiny po podání LVFP, byly myši obětovány a obě uši byly vyříznuty a zváženy. Hmotnostní rozdíl mezi oběma ušima určil stupeň otoku ucha.
2.12. Detekce TNF-α a IL-10 Cytokinů v Séru
sedmého dne, 2 h po LVFP správy, myší krev byla získána pomocí retroorbital sinus punkce a přirozeně sráží po dobu 15 min při pokojové teplotě. Dále byla krev odstředěna po dobu 20 minut a supernatant byl odebrán. TNF-α a IL-10 v supernatantu byly detekovány pomocí souprav ELISA (Nanjing Jiancheng Bioinženýrský Institut, Nanjing, Čína).
2.13. Detekce hladin superoxiddismutázy (SOD), glutathionperoxidázy (GSH-Px) a metanu Dikarboxylového aldehydu (MDA)
osmý den byly myši obětovány a játra byla extrahována. Po mletí a centrifugaci byl odebrán supernatant jaterní tkáně pro detekci SOD, GSH-px a MDA. SOD, GSH-px a MDA byly měřeny pomocí souprav ELISA (Nanjing Jiancheng Bioinženýrský Institut, Nanjing, Čína).
2.14. Barvení hematoxylinem a eosinem (HE)
barvení HE bylo provedeno, jak bylo dříve hlášeno . Osmý den byly myši obětovány a jaterní tkáně byly extrahovány a fixovány v 10% formalinu s neutrálním pufrem. Po vložení do parafínu byly tkáně rozřezány na části 5 µm. Poté byly snímky obarveny HE, aby určily morfologické změny. Snímky byly fotografovány pod světelným mikroskopem (Olympus, Tokio, Japonsko).
2.15. Statistická analýza
experimentální subjekty/přípravky byly náhodně rozděleny do skupin a byly získány stejné velikosti skupin. Přiřazení skupiny, záznam dat a analýza dat nebyly vyšetřovateli sděleny. Data jsou zobrazena jako průměr ± SD z nejméně pěti nezávislých experimentů. One-way ANOVA doprovodu Tukey multiple-srovnání test byl použit pro vícenásobné porovnávání pomocí GraphPad Prism verze 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) , a byl považován za statisticky významný.
3. Výsledky
3.1. FTIR Spektra Analýza LVFP
LVFP byl extrahován po odstranění lipidů pomocí acetonu, teplá voda v kombinaci s ultrazvukem, extrakce, ethanol srážek, pigment odstranit tím, makroporézní pryskyřice, deproteination s Sevage činidla, a malé molekuly odstranění pomocí dialýzy taška, resp. Nová polysacharidová struktura byla navíc charakterizována infračervenou spektroskopií. Analýza spektra FTIR LVFP je znázorněna na obrázku 1(a). Charakteristický široký vrchol při 3345 cm-1 odpovídal roztahovacím vibracím O-H (možná včetně N-H). Absorpční vrchol při 2929 cm-1 odpovídal maximu absorpce vibrací C-H a maximu absorpce cukru. Absorpce při 1599 cm-1 indikovala režimy ohybových vibrací-OH. Vrchol při 1412 cm-1 byl výsledkem přítomnosti ohybových vibrací C-H. Kromě toho absorpce při 1073 cm-1 indikovala ohybové vibrační režimy roztahování C-O ve formě alkoholové hydroxylové skupiny.
3.2. Monosacharid Složení LVFP
monosacharidy skladby LVFP byly analyzovány pomocí HPIC. Jak je znázorněno na Obrázcích 1(b) a 1(c), všechny monosacharidy existující v polysacharidů byly identifikovány podle eluční čas monosacharid norem, s odkazem na standardní křivky. Na LVFP byl složen převážně z rhamnóza, arabinóza, galaktóza a glukóza v molárním poměru 1.79 : 7.55 : 4.58 : 1.54.
3.3. Stanovení molekulové hmotnosti LVFP pomocí HPGFC
molekulová hmotnost LVFP byla detekována pomocí HPGFC. Dextrans (molekulová hmotnost: 180, 2700, 9750, 368000 a 135350 Da) byly použity jako standardy, protože jsou rozpustné ve vodě a dostupné v širokém rozsahu molekulových hmot. Normy poskytly pokyny pro odhad velikosti LVFP. Byla získána standardní křivka (y = -0,523 x + 13,01, R2 = 0,995). Výsledky prokázaly, že molekulová hmotnost LVFP byla 88 949 Da.
3.4. Účinky LVFP na Brzlíku a Sleziny Indexy v Cy-Indukované Imunosupresivní Myši
Cy-indukované imunosuprimovaným myším modelu byla založena na zkoumání imunomodulační aktivitu LVFP. Cy byl podáván jako intraperitoneální injekce (40 mg / kg) každý den po dobu sedmi dnů. Po pěti dnech Cy správy, myši vykazovaly příznaky, jako je ztráta vlasů, nízké vzrušení, agrese, špatná chuť k jídlu, a ztráta hmotnosti, vzhledem k tomu, že žádná zřejmá změna byla pozorována v kontrolní skupině, což naznačuje, že zvířecí model byl úspěšně navázáno. Skupiny CY + LVFP byly podávány různé koncentrace LVFP (100, 200 a 400 mg / kg / den) po dobu sedmi po sobě jdoucích dnů. Indexy sleziny a brzlíku odrážejí imunitní funkce organismu . Účinky LVFP na indexy brzlíku a sleziny u imunosupresivních myší indukovaných Cy jsou znázorněny na obrázku 2. Ve srovnání s kontrolní skupinou vykazovala skupina Cy významný pokles indexů brzlíku a sleziny. Podávání LVFP významně zvýšilo tyto indexy v závislosti na dávce. Tyto výsledky naznačují, že LVFP může ovlivnit imunitní orgány, aby se zvýšila imunita.
()
(b)
(a)
(b)
3.5. Účinky LVFP na neutrofilní fagocytózu u imunosupresivních myší indukovaných Cy
neutrofily jsou účinnou obranou proti invazi mikroorganismů . Fagocytóza je klíčovou strategií neutrofilů při zabíjení patogenů . Fagocytární rychlost a fagocytární index byly zkoumány za účelem zkoumání aktivace neutrofilů . Jak je znázorněno na obrázku 3, ve srovnání s kontrolní skupinou měla Cy skupina významně sníženou fagocytární rychlost a fagocytární index, což naznačuje imunosupresivní stav. LVFP (200 mg/kg a 400 mg/kg) podání významně zmírnilo tyto změny. Tyto výsledky naznačují, že LVFP může zvýšit fagocytární funkci neutrofilů.
()
(b)
(a)
(b)
3.6. Účinky LVFP na humorální imunitu a buněčnou imunitu u imunosupresivních myší vyvolaných Cy
humorální imunita je pro tělo rozhodující pro boj s nádory a infekcemi. Hladina hemolyzinu v séru může být použita k vyhodnocení humorální imunitní odpovědi . Sérový hemolyzin byl snížen léčbou Cy a tato změna byla významně oslabena LVFP v závislosti na dávce (obrázek 4(a)). Různé antigeny z krve mohou aktivovat T lymfocyty. PHA může působit jako mitogen, který spouští aktivaci a proliferaci T buněk . Test transformace T lymfocytů byl proveden za použití myší krve po stimulaci PHA v přítomnosti nebo nepřítomnosti LVFP. Jak je znázorněno na obrázku 4(b), všechny tři dávky LVFP významně inhibovaly CY indukované snížení rychlosti transformace T lymfocytů. DTH odpověď je imunitní odpověď zprostředkovaná T buňkami . Odpověď DTH byla hodnocena měřením stupně otoku ucha. Všechny tři dávky LVFP výrazně oslabily inhibici indukovanou Cy ve stupni otoku ucha (obrázek 4(c)). Tyto výsledky naznačují, že LVFP může aktivovat B A T lymfocyty.
()
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
3.7. Účinky LVFP na Expresi IL-10 a TNF-α v Séru Cy-Indukované Imunosupresivní Myši
Cytokiny vylučované buňkami imunitního systému hrají zásadní roli v hostitelské obraně . IL-10 a TNF-α jsou klíčovými zánětlivými mediátory . ELISA byla provedena za účelem zjištění účinků LVFP na sérovou expresi IL-10 a TNF-α. Naše výsledky ukázaly, že exprese IL-10 a TNF-α byly po léčbě Cy významně sníženy. Podávání LVFP v závislosti na dávce zvýšilo hladiny IL-10 a TNF-α (obrázek 5).
()
(b)
(a)
(b)
3.8. Účinky LVFP na Oxidační Stres v Cy-Indukované Imunosupresivní Myši
Kromě toho, tato studie zkoumala, zda LVFP ulevilo Cy-indukovaný oxidační stres a poškození jater. SOD převádí superoxidový anion na H2O2 a O2, aby se zabránilo a neutralizovalo poškození vyvolané volnými radikály . Předpokládá se, že GSH-px je důležitou endogenní obranou proti peroxidační destrukci buněčné membrány . MDA je konečným produktem peroxidace lipidů a může odrážet oxidační poškození v jaterní tkáni . Obrázky 6(a) -6 (c) ukazují významně snížené projevy SOD a GSH-px, se zvýšenými hladinami MDA v jaterní tkáni po léčbě Cy. Podávání LVFP v závislosti na dávce zvýšilo hladiny SOD a GSH-px a snížilo hladinu MDA. Dále byly změny morfologie jater hodnoceny pomocí barvení HE. Jak je znázorněno na obrázku 6(d), ve skupině Cy byly jaterní buňky řídké a neuspořádané s pyknotickým jádrem. Jaterní sinusoidy byly plné červených krvinek. Jak se očekávalo, jaterní buňky ve skupině LVFP byly uspořádány řádným způsobem s jasným jádrem, srovnatelným s těmi v kontrolní skupině. Výsledky ukázaly, že LVFP může zmírnit oxidační stres a poškození jater vyvolané Cy.
()
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
4. Diskuse
v této studii byl z ovoce Ligustrum vicaryi L. extrahován polysacharid a byly hodnoceny jeho imunomodulační a antioxidační aktivity. Polysacharid byl extrahován pomocí horké vody v kombinaci s ultrazvukem, extrakce, ethanol srážek, odstranění tuku pomocí acetonu, barvivo odstranění podle DM101 makroporézní pryskyřice, deproteination s Sevage činidla (chloroform/1-butanol, v/v = 4 : 1), a malé molekuly odstranění pomocí dialýzy taška, resp. Tato polysacharidová struktura byla navíc charakterizována infračervenou spektroskopií, HPGFC-RID a HPIC. Výsledky ukázaly, že molekulární hmotnost LVFP je 88,949 Da, a LVFP se skládá ze čtyř monosacharidů, a to, rhamnóza, arabinóza, galaktóza a glukóza v molárním poměru 1.79 : 7.55 : 4.58 : 1.54.
imunosuprese je stav dočasné nebo trvalé imunitní dysfunkce a může způsobit, že organismus je citlivější na patogeny. Vývoj nových imunomodulačních činidel je jednou z nejúčinnějších metod prevence a léčby imunosupresivních onemocnění . Například imunomodulační činidla kombinovaná s chemoterapeutickými léky se zdají být užitečná při léčbě rakoviny . Několik zpráv naznačilo pozitivní korelace mezi imunomodulačními účinky a polysacharidy. Ayeka et al. prokázal, že lékořice (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) polysacharid má imunomodulační účinky patrné aktivací populací imunitních buněk CD4+ a CD8+ a zvýšenou produkcí různých cytokinů, jako jsou IL-2, IL-6 a IL-7 . Chen et al. izolované polysacharidy z Schisandra sphenanthera a Schisandra chinensis; tyto extrakty by mohly zvýšit fagocytární aktivitu makrofágů a zlepšit imunitu těla . Údajně, bylo zjištěno, že polysacharidy z Schisandra sphenanthera a Schisandra chinensis byly složeny hlavně ze arabinóza, glukóza, galaktóza, podobné složení LVFP. Aby se zjistilo, zda LVFP má imunomodulační funkce, byl vytvořen imunosuprimovaný myší model indukovaný Cy. Cy je chemoterapeutické činidlo a používá se ke stanovení imunosupresivních zvířecích modelů . Na úrovni imunitních orgánů výsledky ukázaly, že LVFP významně zvýšil indexy sleziny a brzlíku u imunosupresivních myší indukovaných Cy. Na úrovni imunitních buněk bylo pozorováno, že LVFP zvyšuje fagocytární funkci neutrofilů a podporuje aktivaci B A T lymfocytů. Tato data naznačují, že LVFP může zvýšit jak vrozenou, tak adaptivní imunitu.
kromě toho byly také zkoumány imunitně příbuzné cytokiny v séru a výsledky ukázaly, že LVFP zvyšuje hladiny IL-10 a TNF-α. Údajně několik typů polysacharidů může ovlivnit expresi zánětlivých faktorů. Chen et al. pozorováno, že sulfátové polysacharidy z vláknitých mikrořas Tribonema sp. může zvýšit IL-6, IL-10 a TNF-α výrazy v makrofágech . Cheng et al. hlásil, že polysacharidy z divokého Lactarius deliciosus zvýšené sekreci TNF-α, IL-1β a IL-6 v makrofázích . Wang et al. hlásil, že polysacharid z lišejníku Umbilicaria esculenta indukované uvolňování TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6 a IL-10 v myších makrofázích .
antioxidanty jsou látky, které potlačují oxidaci v lidském těle. Obvykle existuje rovnováha mezi produkcí reaktivních druhů kyslíku a antioxidačním obranným systémem, který je nezbytný při normálním metabolismu. Buňky produkují některé endogenní antioxidanty, jako je SOD a GSH-px, aby potlačily nadměrné volné radikály . Tato studie stanovila antioxidační aktivitu LVFP u imunosupresivních myší indukovaných Cy. Výsledky ukázaly, že LVFP vykazoval významný nárůst výrazů SOD a GSH-px. Kromě toho LVFP snížil expresi MDA, což svědčí o oxidačním poškození jater. Barvení ukázalo, že LVFP může zmírnit poškození jaterních buněk vyvolané Cy. Lze tedy dojít k závěru, že LVFP může chránit buňky před poškozením vyvolaným oxidačním stresem zvýšením produkce antioxidantů, jako je SOD a GSH-px. Předchozí výzkum ukázal, že obsah rhamnózy, arabinózy a galaktózy v monosacharidové kompozici může ovlivnit antioxidační aktivitu . Obsah rhamnóza, arabinóza, galaktóza v LVFP je vyšší, což může být důležité pro silnější antioxidační aktivitu prokázal LVFP.
celkově byly extrahovány polysacharidy z ovoce Ligustrum vicaryi L. a byly zkoumány jejich fyzikální a biologické vlastnosti. Na LVFP, mohou být zkoumány jako potenciální imunomodulační a antioxidační činidlo pro terapeutické použití v imunosupresivní onemocnění, což umožňuje pro zavedení tradiční Čínské medicíny na mezinárodní trh.
5. Závěry
Na závěr, LVFP byl extrahován a purifikován z Ligustrum vicaryi L. ovoce s molekulovou hmotností 88,949 Da a sestával ze čtyř monosacharidů, a to, rhamnóza, arabinóza, galaktóza a glukóza. Předběžné farmakologické studie ukázaly, že LVFP může účinně zlepšit imunitní funkce a měl antioxidační aktivitu. Tato studie ukazuje, že LVFP může být slibným imunomodulačním a antioxidačním činidlem pro farmaceutické terapie (Obrázek 7).
Dostupnost Dat
TIF údaje použity na podporu závěrů této studie jsou k dispozici od příslušného autora na požádání.
střet zájmů
autoři prohlašují, že neexistují žádné střety zájmů ohledně zveřejnění tohoto příspěvku.
Poděkování
Tato práce byla podpořena Národní Přírodní Science Foundation Číny (81800399), Jining Medical University Doktorského Výzkumu Spuštění Fondu, Fondu na Národní Úrovni Vysoké školy Studentů Inovace a Podnikání vzdělávací Projekt (201610443011), Shandong Tradiční Čínské Medicíny Rozvoje Vědy a Techniky Programu (2019-0450), a Jining Medical University Student Inovace vzdělávacího Programu (cx2016011/cx2019092).