Analyse von Faktoren, die die Struktur der mikrobiellen Gemeinschaft beeinflussen
Um mögliche Zusammenhänge zwischen den Umweltfaktoren und der Varianz der Gemeinschaft weiter zu untersuchen, wurde eine RDA-Analyse erstellt (Abb. 7). Insgesamt acht Umweltfaktoren, darunter die Spurenelemente Fe, Co, Ni, Temperatur, Salzgehalt, Tiefe, Feuchtigkeit und RO. Die Tiefe und die Lagerstättentemperatur wurden am Probenahmeort gemessen und andere Informationen wurden aus den geologischen Daten der lokalen Minen gewonnen (siehe Tabelle 2). Die in Fig. 7a zeigte, dass die in dieser Studie gefundenen Zusammensetzungen der Bakteriengemeinschaft signifikant von Fe, Ni, Feuchtigkeit, Salzgehalt und RO beeinflusst wurden. Alle Gemeinschaften außer C4, C7, C10 korrelieren positiv mit RO; C4, C7 und C10 korrelieren positiv mit Fe, Ni und Feuchtigkeit. Co wird für das Coenzym M-Methyltransferase benötigt, das ein wichtiges Enzym im biochemischen Metabolismus von Methanogenen ist ; daher ist die Wirkung von Co auf die archaeale Gemeinschaft größer als die der bakteriellen Gemeinschaft. Die Elemente Fe, Co, und Ni; sowie Feuchtigkeit, schien die wichtigsten Umweltfaktoren zu sein, gefolgt von RO und Salzgehalt in der archaealen Gemeinschaft. Es besteht eine signifikante positive Korrelation zwischen Co und den C1, C8, C9, C10-Gemeinschaften. Alle Gemeinschaften außer C2, C4, C6 und C5 korrelierten negativ mit dem Salzgehalt (Abb. 7b).
Coal rank
Der Koalifizierungs- „Sprung“ bezieht sich auf eine Reihe physikalischer und chemischer Veränderungen unter der Temperatur und dem Druck von Kohle während der geologischen Geschichte. Die Kohle hat also einen Prozess allmählicher bis plötzlicher Veränderungen durchlaufen. Die vier Sprünge entsprechen RO von 0,6, 1.3, 2,5 und 3,0%. Unabhängig von der betrachteten Archaeen- oder Bakteriengemeinschaft hat der Kohlerang einen gewissen Einfluss auf die Vielfalt und Häufigkeit der Bakterien. Mit zunehmendem Kohlerang sowohl in der Archaeen- als auch in der Bakteriengemeinschaft zeigt die Diversität der Gemeinschaft insgesamt einen gewissen Abwärtstrend (Abb. 8). Darüber hinaus können Mikroorganismen die Zusammensetzung der Kohle beeinflussen, die durch den Kohleabbau gesteuert wird. Die Kohlen mittleren und niedrigen Ranges enthalten große Mengen an pflanzenentwickelten Substanzen in Gruppe 1, die viele pflanzenentwickelte Substanzen enthält. Hier gibt es einen höheren Gehalt an Wasserstoff, Sauerstoff und Stickstoff; und die von den Bakterien benötigten Nährstoffe sind reichlich vorhanden. Bei der Verkalkung erzeugen organische Substanzen viel Feuchtigkeit und flüssige Kohlenwasserstoffe. Gleichzeitig sind auch die in Kohle enthaltenen Seitenketten von Wasserstoff und Sauerstoff reichlich vorhanden. Diese flüssigen und festen Substanzen bilden die Lebensgrundlage für Bakterien. Infolgedessen sind die Häufigkeit und Vielfalt von Wasserstoff produzierenden Bakterien und Methanogenen in Kohle in dieser Region relativ hoch. Mit der Zunahme von Ro wird der Seitenkettengehalt von Wasserstoff und Sauerstoff in Kohle drastisch reduziert und die den Mikroorganismen zur Verfügung stehenden Komponenten werden ebenfalls reduziert. Daher sind die Artenhäufigkeit und -diversität der Bakterien- und Archaengemeinschaften in Gruppe 2 und Gruppe 3 insgesamt reduziert. Bisher wurde in der Natur festgestellt, dass die Kohleschichten von biogenem Kohlebettmethan eine Reflektivität von 2,0% (C4 Hebi) aufweisen. Nach RO > 2,5% waren die organischen Verbindungen, die in kleine Moleküle umgewandelt werden können, sehr selten, aber in Gruppe 4 gab es eine höhere Vielfalt und Häufigkeit. Wir spekulieren, dass die vom Grundwasser zu diesem Zeitpunkt eingebrachten Nährstoffe für die bakterielle Vermehrung verfügbar sind. Die Nährstoffkomponenten, die das Grundwasser in verschiedenen Regionen und zu verschiedenen Jahreszeiten hervorruft, können zur Artenvielfalt beigetragen haben. Ein Grund für die höhere Pflanzenvielfalt in Gruppe 4 könnte sein, dass das C8 Jiaozuo Jiulishan-Gebiet bessere Grundwasserabflussbedingungen und eine stärkere Wiederauffüllung aufweist. Es kann Nährstoffe für die Flora transportieren, daher ist die Vielfalt und Fülle höher als bei Gruppe 2. Es ist erwähnenswert, dass die Vielfalt und Fülle der archaealen Gemeinschaften in gewissem Maße negativ mit der Kohle korreliert. Die Artenhäufigkeit in den Bakteriengemeinschaften korreliert jedoch positiv mit dem Kohleverbrauch, und die Vielfalt zeigt einen Abwärtstrend. Mit dem Anstieg der Kohleränge passten sich einige Bakteriengruppen allmählich an die Umgebung verschiedener Kohleränge an und können in großer Zahl wachsen und sich vermehren, und Methanogene sind schwer an Kohleränge anzupassen.
Spurenmetallelemente
Spurenmetallelemente können das Wachstum von Mikroorganismen in einem bestimmten Bereich fördern, in dem die Zelle die Homöostase der Elemente durch Stoffwechselregulation aufrechterhält. Spurenmetallelemente können auch in verschiedenen Enzymen vorhanden sein, die von Mikroorganismen im Prozess des anaeroben Stoffwechsels absorbiert und verwendet werden können, was einen Einfluss auf die Gemeinschaftsstruktur von wasserstoffproduzierenden Bakterien und Methanogenen hat (Tabelle 3).
Fe und Ni haben eine größere Wirkung auf Wasserstoff produzierende Bakterien als Co. Fe und Ni können an der Synthese und dem Metabolismus von Hydrogenasen und anderen Metalloenzymen in Mikroorganismen beteiligt sein. Wenn der Gehalt an Fe und Ni in einem bestimmten Bereich zunimmt, nimmt auch die Häufigkeit und Vielfalt der wasserstoffproduzierenden Bakterienpopulationen zu. Der Gehalt an Fe und Ni in C7 ist viel höher als in anderen Regionen, und diese Arbeit hat ergeben, dass Clostridium Wasserstoff produzierende Bakterien sind. Dieser Befund zeigt, dass übermäßige Mengen der Spurenelemente eine toxische Wirkung auf das Wachstum von Mikroorganismen haben und die Aktivität von Metalloenzymen hemmen können. Die Fe-Spiegel in C4, C6 und C9 unterschieden sich nicht signifikant und waren bei 3500 mg Kg−1 stabil (Abb. 9). Die relative Häufigkeit von Ni in den drei Bereichen ist C6 > C9 > C4, was der Abundanzordnung entspricht (auch C6 > C9 > C4), aber die Reihenfolge der Vielfalt ist C6 > C4 > C9. Mitglieder der Gattungen: Clostridium, Klebsiella, Enterobacter und Citrobacter wurden in den C4-, C6- und C9-Gemeinschaften nachgewiesen; einschließlich solcher mit höherer Häufigkeit und Vielfalt als in anderen Regionen.
In der archaealen Gemeinschaft ist der Einfluss von Fe, Co und Ni auf die Methanogene noch wichtiger. Co ist ein Schlüsselelement bei der Synthese von methanogenem Coenzym F430 , und der Co-Gehalt in den ersten drei ist C8 > C7 > C10, Methanogenspezies und Häufigkeit sind C8 > C7 > C10. Der Gehalt an Co korreliert in gewissem Maße positiv mit der Häufigkeit und Vielfalt von Methanogenen. Obwohl der Gehalt an Fe in C7 viel höher ist als in anderen Regionen, hat dies keinen Einfluss auf die Verteilung von Methanogenen in der Region. Es gibt nur wenige Arten von Methanogenen, die Fe enthalten können – in früheren Studien wurde nur eine Art namens Methanothermobacter entdeckt. Die Anwesenheit von monoferrischer Hydrogenase in Methanogenen von M. marburgensis katalysiert die reversible Reaktion von Methenyl-H4MPT + und H2 zur Erzeugung von Methylen-H4MPT und H +; Herstellung von Methan aus CO2 und H2 . Methanogene, die den hydrogenotrophen Metabolismus verwenden, können auch ähnliche Enzyme enthalten. Darüber hinaus wird spekuliert, dass ein großer Teil der methylotrophen Methanogene solche Enzyme außer dem Methanoculleus und Methanobakterien beherbergt. Es wird spekuliert, dass in den methylotrophen Methanogenen ein Metalloenzym mit Fe assoziiert sein könnte.
Grundwasserbedingungen
Grundwasser liefert direkt oder indirekt eine ökologische Grundlage für das Wachstum und den Stoffwechsel von Extremophilen im Kohleflöz. Einerseits liefert die Grundwasserneubildung große Mengen an Nährstoffen für Bakterien- und Archaengemeinschaften; andererseits beeinflussen die Umweltbedingungen des Grundwassers (Eh, pH-Wert, Salzgehalt, Ionenzusammensetzung und Spurenelemente) direkt das mikrobielle Wachstum und die metabolische Enzymaktivität. Die Umweltbedingungen des Grundwassers stehen in direktem Zusammenhang mit der Verwendung und dem Abbau von Kohle, und die im Kohleflöz befindlichen Mikroorganismen weisen unterschiedliche Gemeinschaftsstrukturen und funktionelle Eigenschaften auf.
Mikrobielle Nährsubstrate werden im Allgemeinen gelöst. Die Abflusszone im Bergbaugebiet kann das Überleben von Kohleflözen ermöglichen. Reservoirs mit hoher Permeabilität haben einen positiven Einfluss auf das Wachstum und die Vermehrung von Wasserstoff produzierenden Bakterien und Methanogenen, während Metamorphismus einen signifikanten negativen Einfluss auf die Kohlepermeabilität in Kohlereservoirs hat . In Gebieten mit biogenem CBM sind die C2-, C4-, C6- und C7-Gemeinschaften alle gut dokumentiert. Diese Gemeinschaften gehören zum niedrigen und mittleren Kohlerang, die Porosität von Kohle ist relativ höher als bei Kohle mit hohem Rang, Grundwasser kann den Mikroben im Kohleflöz rechtzeitig Nährstoffe zuführen. Die aktuelle CBM-Entwicklungszone im Powder River Basin in den USA. konzentriert sich hauptsächlich in der Grundwasserabflusszone. Die gasstabilen Isotopendaten aus einem flachen CBM-Bohrloch im Bergbaugebiet C6 bestätigten auch das Vorhandensein von biogenetischem CBM in dem Gebiet. Gasstabile Isotopendaten aus einem anderen tiefen CBM-Bohrloch zeigten jedoch, dass das CBM hauptsächlich thermogen ist. Diese Ergebnisse zeigen, dass mit zunehmender Bestattungstiefe die Abflussbedingungen schwächer werden und es schwierig wird, Nährstoffe für den Mikroorganismus zu transportieren, was zu einer Abnahme der Häufigkeit und Vielfalt der Gemeinschaft führen wird. Das Dach und der Boden der Nr. 2 Kohleflöze im C2-Bereich weisen relativ stabile Schichten aus Tonstein und Tongestein auf, was es den wasserstoffproduzierenden Bakterien und Methanogenen im Kohleflöz erschwert, flüssige Nährstoffe zu erhalten, und ihr Wachstum und ihren Stoffwechsel und damit ihre Gemeinschaft einschränkt Vielfalt und Fülle. Beachten Sie, dass in diesem Bereich der Chao1-Index 240 und der Shannon-Index 1,38 in der Bakteriengemeinschaft beträgt. Der Chao1-Index von Methanogenen ist 82, der Shannon-Index ist 0,56. Das Sandstein-Grundwasserleiterdach im C4-Bereich der Nr. 21 Kohleflöz hat bessere Wiederaufladebedingungen und füllt das Kohleflöz mit Wasser. Es ist möglich, dass die mikrobielle Gemeinschaft kumulative Effekte aus der ausreichenden Verfügbarkeit verschiedener Nährstoffe erfährt, die den Transport beeinflussen, verglichen mit der Häufigkeit und Vielfalt der Mikroorganismengemeinschaft im C2-Bereich, die sich stark verbessert hat. In diesem Bereich beträgt der Chao1-Index der wasserstoffproduzierenden Bakterien 148, der Shannon-Index 1,52, der Chao1-Index der Methanogene 368 und der Shannon-Index 2,35. Der Sandstein-Spaltgrundwasserleiter des C6-Gebiets ist ein direkter wassergefüllter Grundwasserleiter des Kohleflözes Nr. 3. Frakturentwicklung innerhalb der Schicht und moderate Aquäosität spielt auch eine aktive Rolle in der Fülle und Vielfalt der Gemeinschaft. Hier beträgt der Chao1-Index der wasserstoffproduzierenden Bakterien 472, der Shannon-Index 1,56, der Chao1-Index der Methanogene 384 und der Shannon-Index 1,08. Dies ist auch im C7-Bereich der Fall, das Kohleflöz Nr.5 hat einen direkt gebrochenen Grundwasserleiter mit guten Wiederaufladebedingungen, der Abundanzindex der wasserstoffproduzierenden Bakterien beträgt 458, der Shannon-Index beträgt 1,98; und der Chao1-Index der Methanogene ist 256 und der Shannon-Index ist 2,47. Daher ist die Artenvielfalt von Wasserstoff produzierenden Bakterien und Methanogenen in C4, C6 und C7 höher als in C2.
Die Umweltbedingungen des Grundwassers wirken sich direkt auf das Wachstum und den Stoffwechsel von Mikroorganismen aus. Der pH-Wert des Kohlebettgrundwassers ist im Allgemeinen neutral, aber der pH−Wert variiert zwischen 6,5 und 8,4 im gebrochenen Grundwasserleiter im Kohleflöz C4 area No. 21 und der Salzgehalt beträgt 1,0 g L-1. In der direkten Grundwasserleiterschicht der Nr. 3 Kohleflöz Im C6-Bereich liegt der pH-Wert zwischen pH 6,8 und 8,0 und der Salzgehalt beträgt 0,7 g L−1. Der Grundwasser-pH-Wert des C7-Gebiets beträgt 6,1−7,3 und der Salzgehalt beträgt 1,25 g L-1. Der pH-Wert in C4, C6 und C7 ist nahezu neutral und der Mineralisierungsgrad ist gering, wobei die Mikroorganismengemeinschaft ein besseres Wachstum, eine höhere Häufigkeit und eine höhere Vielfalt aufweist. Darüber hinaus hängen der Salzgehalt des Grundwassers und die Ionenzusammensetzung eng mit der anaeroben Reduktionsumgebung des Kohleflözes zusammen. Zum Beispiel wird SO42- verwendet, um die geschlossenen Bedingungen des Grundwassers zu bewerten, und HCO3− ist das Produkt der anaeroben Entschwefelungsreaktion von SO42−, so hoch HCO3− kann als Zeichen für eine gute Abdichtung und eine starke Reduktion des Kohlebettgrundwassers verwendet werden. Die Wasserchemie im C4-Bereich ist HCO3 · SO4-Ca * Mg, die Wasserchemie im C7–Bereich ähnelt dem C4-Bereich HCO3 · SO4-Ca · Na und bietet eine relativ geschlossene anaerobe Umgebung. In diesem Fall beträgt der Chao1-Index der wasserstoffproduzierenden Bakterien in C4 148, der Shannon-Index 1,52; der Chao1-Index der Methanogene beträgt 368, der Shannon-Index 2,35. Der Chao1-Index der wasserstoffproduzierenden Bakterien in C7 beträgt 458, der Shannon-Index 1,98, der Chao1-Index 256 und der Shannon-Index 2,47. In C6 ist die Wasserchemie SO4 · HCO3-K * Na und SO42− ist dominant, während der Chao1-Index der wasserstoffproduzierenden Bakterien in C6 472 ist, der Shannon-Index 1,56 ist, der Chao1-Index der Methanogene 384 ist und der Shannon-Index 1,08 ist. Die Daten zeigen, dass die Diversität in C6 etwas geringer ist als in C4 und C7.
Einige wasserstoffproduzierende Bakterien und Methanogene wurden in C8- und C9-Gebieten in dem Gebiet nachgewiesen, in dem kein Biomethan gefunden wurde. Es war auch bemerkenswert, dass die Grundwasserbedingungen dieser beiden Gebiete denen in den oben genannten biogenen Methangebieten ähneln, die sich in der Grundwasserabflusszone befinden und die Grundwasserneubildung etwas organisches Material besser in das Kohleflöz transportieren kann, so dass eine große Anzahl von Bakterien wächst und sich vermehrt, was einer der Gründe für die höhere Artenhäufigkeit und -vielfalt von C8 und C9 ist.
Temperatur
Temperatur- und Spurenmetallelemente beeinflussen die Häufigkeit und Vielfalt mikrobieller Gemeinschaften, indem sie sowohl das Wachstum und den Stoffwechsel von Mikroorganismen als auch ihre metabolische Umgebung direkt verändern. Aus mikrobiologischer Sicht ist daher die optimale Temperatur einer der wichtigsten Faktoren, die das Wachstum und den Stoffwechsel von Mikroorganismen beeinflussen. Abbildung 5b zeigt, dass die Temperatur einen relativ schwachen Einfluss auf die Häufigkeit und Vielfalt von Methanogenen ausübt, obwohl wasserstoffproduzierende Bakterien in einer engen ökologischen Amplitude existieren und empfindlich auf Temperaturänderungen reagieren. Diese Variable korreliert mit der Artenhäufigkeit und -vielfalt, und die Ergebnisse dieser Studie zeigen, dass die Temperatur des Kohleflözes (d. H. Zwischen 25 und 27 ° C) positiv mit der Häufigkeit der Bakterienpopulation korreliert. Bei C8 betrug die Temperatur 27, 2 ° C, die höchste in dieser Studie gemessene Temperatur. Der Chao1-Index der wasserstoffproduzierenden Bakterien betrug 510 und der Shannon–Index 2,61, ebenfalls der höchste unter den Proben (C1-C8). Die niedrigste Temperatur, 24,9 ° C, wurde bei C1 gefunden, wo der Chao1-Index der Bakteriengemeinschaft am niedrigsten war. Die Häufigkeit und Vielfalt mikrobieller Arten nimmt mit der Temperatur in C3 > C6 > C2 > C7 > C5 > C4 zu. Geothermische Gradientenanomalien bei C9 und C10 verursachten viel höhere Temperaturen; Die Umgebungstemperaturen bei C9 und C10 betrugen 34,60 ° C bzw. 40,10 ° C. Der Chao1-Index der wasserstoffproduzierenden Bakterien in C9 betrug 176 und der Shannon-Index 1,28; Der Chao1-Index ist 237, der Shannon-Index ist 1,58. Im Vergleich zu den ersten acht Gebieten ist die Fülle und Vielfalt leicht zurückgegangen. Hier können sowohl wasserstoffproduzierende Bakterien als auch Methanogene bei Umgebungstemperatur wachsen und sich vermehren.
Mikrobielle syntrophe Interaktionen
In der extremen Umgebung des Kohleflözes bilden sich unter den Mikroorganismen im Kohleflöz Bakterienkonsortien. Durch den Austausch von Metaboliten und mikroumweltkontrollierte Symbiose, Wettbewerb und Ressourcenallokation bleiben die spezifischen Funktionen der mikrobiellen Gemeinschaft erhalten, die den Biomethanproduktionsweg im Kohleflöz bestimmt. Methanothrix, die Essigsäure in Methan umwandeln, ist die dominierende Gattung in der Methanogengemeinschaft des C1-Gebiets. Die mit Alkalibaculum und Desulfosporosinus assoziierten Bakterien sind homoacetogene Bakterien, die H2 als Elektronendonor zur Herstellung von Essigsäure verwenden. Sie sind die Hauptkonkurrenten für hydrogenotrophe Methanogene und liefern auch metabolisches Substrat für Methanogene. Wasserstoffproduzierende Bakterien wie Clostridium und Tissierella liefern auch Essigsäure, und somit bietet die hohe Häufigkeit von wasserstoffproduzierenden Bakterien ein reiches metabolisches Substrat für Methanothrix. Zusammen stehen die Methanogene und die Wasserstoff produzierenden Bakterien in syntropher Wechselwirkung und der Methanerzeugungsweg in diesem Bereich wird durch die Zersetzung von Essigsäure bestimmt. Die Methanogene in C2, C4 und C6 sind hauptsächlich hydrogenotrophe Methanogene. Hydrolytische Fermentationsbakterien und Acetogene tragen beide zur Produktion von Essigsäure und H2 bei. Sie produzieren auch Enzyme, Cofaktoren und Stoffwechselsignale, um die Wasserstoffproduktion zu regulieren. Darüber hinaus konkurrieren homoacetogene Bakterien und Acetogene in diesen Bereichen nicht. Hydrogenotrophe Methanogene können aus CO2 und H2, das in der vorherigen Stufe erzeugt wurde, Methan produzieren. Daher werden Stoffwechselwege in diesen Bereichen hauptsächlich für H2, Formiat und andere Substanzen verwendet.
Mehr als 99% der C3-Fläche beherbergen methylotrophe Methanogene wie: Methanolobus. Brevibacter, Paenibacillus, Brochothrix und Lactococcus. Frühere Studien zeigten, dass methoxyaromatische Verbindungen (ein wichtiger Bestandteil von Lignocellulose) zu Methanol und anderen Substanzen abgebaut werden . Mikroorganismen in dieser Region können die lignozelluloseähnliche Substanz der Kohle abbauen, um Ressourcen für methylotrophe Methanogene bereitzustellen. Diese einfache mikrobielle Gemeinschaft kann keine ausreichenden Substrate für Methanogene bereitstellen, die H2 verbrauchen. Der Biomethan-Produktionsweg in diesem Bereich basiert auf dem Verbrauch von Methylverbindungen.
Staphylococcus wurde auch im C3-Bereich nachgewiesen. Kürzlich wurde Staphylococcus AntiMn-1 aus Tiefseesedimenten im Clarion-Clipperton-Gebiet mit hohem Mangangehalt isoliert. Es enthielt Gene mit hoher Resistenz gegen Mangan, von dem angenommen wird, dass es sich um eine Anpassung an die marine Sedimentumgebung handelt . Der Schwermetallgehalt im C3-Bereich ist relativ hoch. Es kann sein, dass die Kohleflözumgebung die Expression von Resistenzgenen wirksam induzieren kann, was antagonistische und entgiftende Wirkungen auf den Transport und die Toxizität von Schwermetallen innerhalb von Mikroorganismen haben kann. Staphylococcus in diesem Bereich kann Resistenzgene enthalten, um sich an die Kohleflözumgebung anzupassen, so dass er auch am Fermentationsstoffwechsel von Kohle beteiligt sein kann. Es gibt viele verschiedene Arten von Methanogenen in C7, und die wasserstoffproduzierenden Bakterien werden von Clostridium, Bacillus, Citrobacter und anderen Anaerobiern dominiert, die Substrate für acetoklastische Methanogene und auch H2, CO2 und Formiat für hydrogenotrophe Methanogene bereitstellen. Darüber hinaus reduziert die akkumulierende Essigsäure sulfatreduzierende Bakterien, einschließlich Desulfosporosinus und Desulfitobacterium. Die SRB haben eine stärkere Affinität zu Essigsäure als acetoklastische Methanogene, konkurrieren jedoch nicht mit methylotrophen Methanogenen um bestimmte Substrate wie Methanol. Somit kann der Metabolismus sowohl von sulfatreduzierenden Bakterien als auch von Methanogenen in diesem Bereich gleichzeitig ablaufen . Der Metabolismus in C7 wurde von methylotrophen Methanogenen dominiert, gefolgt von Essigsäuregärung und anschließender Kohlendioxidreduktion.