Résumé
Ligustrum vicaryi L. est un hybride de Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum et Ligustrum vulgale L., appartenant à la famille des oléacées. Il est souvent utilisé comme arbuste ornemental en raison de ses feuilles dorées. Cependant, sa valeur médicale reste à découvrir. Récemment, les polysaccharides végétaux ont attiré l’attention en raison de leurs propriétés biologiques, y compris leurs activités immunomodulatrices et antioxydantes. Cette étude visait à extraire, purifier et caractériser le polysaccharide du fruit Ligustrum vicaryi L. et à étudier ses activités immunomodulatrices et antioxydantes. Le polysaccharide Ligustrum vicaryi L. fruit (LVFP) a été obtenu par extraction par ultrasons, précipitation à l’éthanol, séparation de la résine macroporeuse et purification par sac de dialyse. Les propriétés physico-chimiques du LVFP ont été élucidées à l’aide de la spectrométrie infrarouge à transformée de Fourier, de la chromatographie ionique haute performance et de la chromatographie par filtration sur gel haute performance. Les résultats ont indiqué que le LVFP était composé de rhamnose, d’arabinose, de galactose et de glucose dans un rapport de 1,79: 7,55: 4,58: 1,54 et que son poids moléculaire était de 88 949 Da. Les activités immunomodulatrices et antioxydantes du LVFP ont été étudiées à l’aide d’un modèle murin immunosupprimé induit par le cyclophosphamide (Cy-). Les résultats ont démontré que le LVFP augmentait significativement les indices de la rate et du thymus, augmentait la fonction phagocytaire des neutrophiles, activait les lymphocytes B et T et régulait à la hausse les taux sériques d’IL-10 et de TNF-α. De plus, nous avons observé que le LVFP soulageait les lésions hépatiques induites par le Cy en augmentant les taux de superoxyde dismutase (SOD) et de glutathion peroxydase (GSH-px). Ces résultats suggèrent que le LVFP a des activités immunomodulatrices et antioxydantes, jetant ainsi les bases de l’application du LVFP dans les industries pharmaceutiques et alimentaires fonctionnelles.
1. Introduction
Les immunomodulateurs peuvent être utilisés comme stratégies préventives ou thérapeutiques, stimulant ou supprimant la réponse de défense de l’hôte. Les produits naturels ayant des fonctions immunomodulatrices et antioxydantes sont largement utilisés pour traiter plusieurs maladies, notamment les maladies auto-immunes, les troubles inflammatoires et le cancer. Récemment, l’utilisation d’agents chimiothérapeutiques synthétiques a suscité un intérêt croissant pour les produits naturels peu coûteux et moins toxiques.
Ligustrum vicaryi L. est un hybride de Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum et Ligustrum vulgale L., appartenant à la famille des oléacées. Il présente un phénotype sans chlorophylle et est largement utilisé comme arbuste horticole en raison de ses feuilles dorées. Selon les caractéristiques d’échange de gaz et les réponses de fluorescence de la chlorophylle, Ligustrum vicaryi L. peut résister au SO2 et peut donc être utilisé pour la phytostabilisation de sols contaminés par le Cd. Bien que Ligustrum vicaryi L. ait une valeur ornementale et environnementale élevée, son potentiel thérapeutique reste à élucider.
Les polysaccharides végétaux, une classe de macromolécules biologiques importantes que l’on trouve couramment dans les herbes médicinales traditionnelles, présentent une gamme d’activités biologiques, notamment des activités antioxydantes, immunomodulatrices, anti-âge, antitumorales et anti-inflammatoires. Ces dernières années, de nombreuses études ont été consacrées à l’extraction et à l’analyse de la bioactivité des polysaccharides végétaux. Les polysaccharides de fruits végétaux sont les plus couramment étudiés, y compris les polysaccharides de jujubes, les polysaccharides de kaki et les polysaccharides de pastèque. À notre connaissance, aucune étude basée sur la préparation et les bioactivités des polysaccharides de fruits de Ligustrum vicaryi L. (LVFPs) n’a été rapportée.
Dans cette étude, le LVFP a été extrait et purifié. Ensuite, le poids moléculaire et la composition en monosaccharides du LVFP ont été analysés. De plus, les fonctions biologiques du LVFP ont été évaluées dans un modèle murin immunosupprimé induit par le cyclophosphamide (Cy-). Les résultats ont démontré que le LVFP a une capacité immunomodulatrice en activant à la fois l’immunité innée et l’immunité adaptative. De plus, le LVFP a démontré une activité antioxydante en augmentant la superoxyde dismutase (SOD) et la glutathion peroxydase (GSH-px). Cette étude a présenté une base théorique pour développer le LVFP comme remède thérapeutique alternatif pour les maladies immunitaires.
2. Matériaux et méthodes
2.1. Déclarations sur le bien-être animal et l’éthique
Toutes les procédures expérimentales étaient conformes aux recommandations des directives ARRIVEE (animal research: reporting in vivo experiments). Le Comité institutionnel de Soins et d’utilisation des Animaux de l’Université médicale de Jining a approuvé les procédures. Toutes les procédures expérimentales ont été menées aussi humainement que possible. Au total, 100 souris de Kunming mâles en bonne santé pesant de 20 à 25 g ont été hébergées dans des conditions de maintien de 12 h d’un cycle artificiel sombre-clair, avec de la nourriture et de l’eau disponibles ad libitum. Les animaux étaient logés dans des chambres standard pour animaux, avec une température de 20-22 ° C et une humidité de 55-60%.
2.2. Extraction et Purification du Polysaccharide
Ligustrum vicaryi L. les fruits ont été obtenus du jardin botanique de l’Université médicale de Jining (Rizhao, Shandong, Chine) et identifiés par Jianan Wang (Botaniste médical, École de Pharmacie, Université Médicale de Jining). Les fruits séchés de Ligustrum vicaryi L. ont été pulvérisés et tamisés à travers un tamis à 40 mailles. La poudre est immergée dans de l’acétone (le rapport poudre/acétone est de 1:3) et agitée pendant 24 h pour éliminer les lipides. Le surnageant a été jeté et les restes ont été séchés au four. Le polysaccharide a été extrait avec de l’eau distillée 8:1 (v/w) à 50°C pendant 80 min en utilisant une puissance ultrasonore de 250 W. L’extrait d’eau a été filtré à l’aide de coton. Le résidu est éliminé après centrifugation à 3000 tr/min pendant 3 min. Ensuite, le surnageant concentré a été précipité avec 70% d’éthanol, et ce procédé a été répété avec 95% d’éthanol. Après élimination du surnageant, de l’eau distillée a été ajoutée pour dissoudre l’extrait et le résidu a été éliminé par centrifugation. La résine macroporeuse DM101 a été utilisée pour éliminer le pigment. Le réactif de Sevage (chloroforme/1-butanol, v/v = 4 : 1) a été utilisé pour éliminer la protéine jusqu’à ce qu’aucune réaction de décoloration n’ait été observée en utilisant la détection de Coomassie Brilliant Blue G-250. Les polysaccharides ont été placés dans un séchoir à congélation pendant 24 h pour obtenir la poudre congelée. Les petites molécules du polysaccharide ont été éliminées à l’aide d’un sac de dialyse (coupure moléculaire de 3500 Da) pendant deux jours, et de l’eau distillée a été remplacée toutes les 12 h. La chromatographie sur colonne Sephadex G-200 a été utilisée pour purifier le LVFP. Le dosage anthrone-acide sulfurique, avec une courbe étalon de glucose, a été utilisé pour déterminer la pureté du LVFP.
2.3. Analyse infrarouge par transformée de Fourier (IRTF)
Le LVFP a été mélangé avec de la poudre de bromure de potassium pur, et le mélange a été placé dans un mortier d’agate et broyé uniformément sous une lampe infrarouge. Le mélange a été évalué à l’aide du spectromètre infrarouge à transformée de fourier IRTracer-100 (Shimadzu, Japon).
2.4. Chromatographie ionique Haute Performance (HPIC)
Pour l’analyse HPIC, 5 mg de LVFP ont été dissous dans 1 mL d’acide trifluoroacétique à 2 moles/L et placés à 121 °C pendant 2 h pour l’hydrolyse. Ensuite, le mélange a été filtré à l’aide d’une membrane de filtration microporeuse de 0,45 µm. La séparation chromatographique des monosaccharides a été réalisée sur le chromatographe ionique ICS-5000 équipé d’une colonne CarboPac PA20 et d’un détecteur d’ampères d’impulsions. Les conditions de séparation par chromatographie ionique ont été ajustées et testées pour un mélange de huit étalons monosaccharidiques (fucose, rhamnose, arabinose, galactose, glucose, xylose, mannose et fructose). Une séparation supérieure a été obtenue par élution par gradient avec un débit constant de 0,5 mL/min. La phase mobile était composée de NaOH (A) de 250 mM, d’eau (contenant 1 M de NaAc%, v/v, B) et d’eau (C). L’élution a été effectuée comme suit : 2.0% A à 0∼21 min; 2,0 % A et 5,0% B à 21,1 min; 2,0 % A et 20% B à 21,1∼30 min; et 80 % A à 30,1∼50 min.
2.5. Chromatographie de Filtration sur Gel Haute Performance (HPGFC)
La masse moléculaire du polysaccharide a été analysée par HPGFC (Waters, New York, USA) et équipée du RID (détecteur d’indice de réfraction 2414) et du poste de travail Empower 3. Les conditions chromatographiques étaient les suivantes : colonne chromatographique : Ultrahydrogel™ Linéaire, 300 mm × 7,8 mm × 2, phase mobile: 0,1 M NaNO3, débit: 0,9 mL/min et température de la colonne: 45 °C. L’échantillon est dissous dans la phase liquide et filtré par une membrane de filtration microporeuse. Les étalons de poids moléculaire utilisés pour la courbe d’étalonnage étaient les MW135350, MW36800, MW9750, MW2700 et MW180.
2.6. Modèle Murin Immunosuppresseur induit par le cyclophosphamide (Cy-) et administration de LVFP
Un total de 100 souris ont été divisées au hasard en cinq groupes: contrôle, Cy, Cy + LVFP (100 mg / kg / jour), Cy + LVFP (200 mg / kg / jour) et Cy + LVFP (400 mg / kg / jour). Le groupe témoin a reçu une solution saline normale et les quatre autres groupes ont reçu une injection intrapéritonéale de Cy (40 mg / kg) tous les jours pendant sept jours. Le LVFP a été administré par administration intragastrique pendant sept jours consécutifs.
2.7. Détermination des indices de rate et de Thymus
Toutes les souris ont été pesées et sacrifiées 24 h après la dernière administration du médicament. La rate et le thymus ont été excisés et pesés. L’indice de la rate ou du thymus a été exprimé comme le rapport entre le poids de la rate ou du thymus et le poids corporel.
2.8. La détermination de la fonction phagocytaire des neutrophiles de souris
Staphylococcus aureus a été utilisée pour évaluer la phagocytose des neutrophiles. En bref, 40 µL de sang ont été obtenus à partir de souris après administration de LVFP et placés dans un tube d’héparine pour éviter la coagulation. Ensuite, 40 µL de suspension bactérienne ont été ajoutés au tube précité. Le mélange a été uniformément enduit sur des lames de verre et maintenu à température ambiante pendant 0,5 h. Ensuite, le mélange a été fixé avec 2-3 gouttes de méthanol pendant 5 min et coloré avec 4-5 gouttes de teinture de Wright pendant 5 min. Un total de 100 neutrophiles ont été observés et enregistrés. Le taux de phagocytose des neutrophiles et l’indice de phagocytose des neutrophiles ont été calculés comme suit : le taux de phagocytose des neutrophiles = le nombre de neutrophiles présentant une fonction phagocytaire / le nombre total de neutrophiles et l’indice de phagocytose des neutrophiles = le nombre total de bactéries qui avaient été englouties par des neutrophiles / le nombre total de neutrophiles.
2.9. Détermination de l’hémolysine sérique par ELISA
Le quatrième jour, 5% d’une suspension de globules rouges de poulet (CRBC) a été injectée par voie intrapéritonéale aux souris (0,1 mL/ 10 g). Le septième jour, 2 h après l’administration de LVFP, 1 mL de sang de souris a été obtenu et centrifugé pendant 10 min. Ensuite, 40 µL de sérum ont été ajoutés à 2 mL de solution saline normale. Un mL de sérum de cobaye à 10% et 1 mL de suspension de CRBC à 5% ont été ajoutés au sérum, suivi d’une incubation au bain-marie à 37 ° C pendant 0,5 h. Le mélange a été centrifugé et le surnageant a été placé dans une plaque de culture à 96 puits. La valeur de densité optique correspondante a été détectée par l’instrument Thermo Scientific Multiskan MK3 Enzyme Mark (Waltham, MA, USA).
2.10. Détermination du taux de transformation des lymphocytes T
Le deuxième jour, les souris ont reçu une injection intramusculaire de 8 mg/kg de phytohémagglutinine (PHA). Le septième jour, 2 h après l’administration de LVFP, 40 µL de sang ont été prélevés dans le sinus rétroorbital, placés sur une lame et colorés avec 4 à 5 gouttes de tache de Wright. L’excès de colorant a été rincé à l’eau après 20 min. À l’aide d’un microscope, 100 cellules ont été observées. Les lymphocytes transformés ont été calculés comme suit: taux de transformation des lymphocytes = lymphocytes transformés / nombre total de lymphocytes.
2.11. Réponse d’hypersensibilité de type retardé (SRD)
La réponse par SRD a été examinée par le degré de gonflement de l’oreille. En général, on pense que le degré de gonflement de l’oreille reflète le degré d’inflammation. La réponse par SRD a été mesurée comme suit : Le deuxième jour, 1 cm2 de poils abdominaux ont été enlevés à l’aide de Na2S et la peau abdominale a été recouverte de 25 µL de solution de 1-fluoro-2,4-dinitrobenzène (DNFB). Le sixième jour, la peau de l’oreille droite a été enduite de 20 µL de solution de DNFB. Le septième jour, 2 h après l’administration de LVFP, les souris ont été sacrifiées et les deux oreilles ont été excisées et pesées. La différence de poids entre les deux oreilles a déterminé le degré de gonflement de l’oreille.
2.12. Détection des cytokines TNF-α et IL-10 dans le sérum
Le septième jour, 2 h après l’administration de LVFP, le sang de souris a été obtenu par ponction du sinus rétroorbital et coagulé naturellement pendant 15 min à température ambiante. Ensuite, le sang a été centrifugé pendant 20 min et le surnageant a été recueilli. Le TNF-α et l’IL-10 dans le surnageant ont été détectés à l’aide de kits ELISA (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Chine).
2.13. Détection des taux de Superoxyde Dismutase (SOD), de Glutathion Peroxydase (GSH-Px) et d’Aldéhyde dicarboxylique (MDA)
Le huitième jour, les souris ont été sacrifiées et les foies ont été extraits. Après broyage et centrifugation, le surnageant de tissu hépatique a été collecté pour la détection de SOD, de GSH-px et de MDA. SOD, GSH-px et MDA ont été mesurés à l’aide de kits ELISA (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Chine).
2.14. Coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (HE)
La coloration à l’HE a été réalisée comme indiqué précédemment. Le huitième jour, les souris ont été sacrifiées et les tissus hépatiques ont été extraits et fixés dans du formol tamponné neutre à 10%. Après incorporation dans la paraffine, les tissus ont été découpés en sections de 5 µm. Ensuite, les diapositives ont été colorées avec HE pour déterminer les changements morphologiques. Les images ont été photographiées au microscope optique (Olympus, Tokyo, Japon).
2.15. Analyse statistique
Les sujets/ préparations expérimentaux ont été assignés au hasard à des groupes, et des tailles de groupe égales ont été obtenues. Les affectations de groupe, l’enregistrement des données et l’analyse des données n’ont pas été divulgués à l’enquêteur. Les données sont présentées comme la moyenne ± SD d’au moins cinq expériences indépendantes. L’ANOVA unidirectionnelle accompagnée du test de comparaisons multiples de Tukey a été utilisée pour des comparaisons multiples à l’aide de GraphPad Prism version 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA), et a été considérée comme statistiquement significative.
3. Résultats
3.1. Analyse spectrale IRTF du LVFP
Le LVFP a été extrait par élimination des lipides via l’acétone, l’eau chaude combinée à une extraction par ultrasons, la précipitation de l’éthanol, l’élimination des pigments par résine macroporeuse, la déprotéination avec le réactif Sevage et l’élimination des petites molécules par un sac de dialyse, respectivement. De plus, la nouvelle structure polysaccharidique a été caractérisée par spectroscopie infrarouge. L’analyse spectrale IRTF du LVFP est illustrée à la figure 1(a). Le pic large caractéristique à 3345 cm-1 correspondait à la vibration d’étirement O-H (y compris peut-être N-H). Le pic d’absorption à 2929 cm−1 correspondait au pic d’absorption des vibrations d’étirement C-H et au pic d’absorption du sucre. L’absorption à 1599 cm−1 indiquait les modes de vibration de flexion de -OH. Le pic à 1412 cm-1 résulte de la présence de vibrations de flexion C-H. De plus, les absorptions à 1073 cm−1 indiquaient les modes de vibration de flexion de l’étirement C-O sous forme de groupe hydroxyle alcoolique.
3.2. Composition monosaccharidique du LVFP
Les compositions monosaccharidiques du LVFP ont été analysées par HPIC. Comme le montrent les figures 1(b) et 1(c), tous les monosaccharides présents dans les polysaccharides ont été identifiés en fonction du temps d’élution des étalons monosaccharidiques, en référence à une courbe étalon. Le LVFP était principalement composé de rhamnose, d’arabinose, de galactose et de glucose dans un rapport molaire de 1,79: 7,55: 4,58: 1,54.
3.3. Détermination du poids moléculaire du LVFP par HPGFC
Le poids moléculaire du LVFP a été détecté par HPGFC. Dextranes (poids moléculaire: 180, 2700, 9750, 368000 et 135350 Da) ont été utilisés comme étalons car ils sont solubles dans l’eau et disponibles dans une large gamme de masses moléculaires. Les normes fournissaient des lignes directrices sur l’estimation de la taille du PFVL. Une courbe standard a été obtenue (y = -0,523x + 13,01, R2 = 0,995). Les résultats ont démontré que le poids moléculaire du LVFP était de 88 949 Da.
3.4. Effets du LVFP sur les indices du Thymus et de la rate chez des souris immunosuppressives induites par le Cy
Le modèle de souris immunosuppressives induites par le Cy a été établi pour étudier l’activité immunomodulatrice du LVFP. Cy a été administré par injection intrapéritonéale (40 mg / kg) tous les jours pendant sept jours. Après cinq jours d’administration de Cy, les souris présentaient des symptômes tels que perte de cheveux, faible excitation, agressivité, manque d’appétit et perte de poids, alors qu’aucun changement évident n’a été observé dans le groupe témoin, indiquant que le modèle animal a été établi avec succès. Les groupes Cy + LVFP ont reçu différentes concentrations de LVFP (100, 200 et 400 mg / kg / jour) pendant sept jours consécutifs. Les index de la rate et du thymus reflètent les fonctions immunitaires de l’organisme. Les effets du LVFP sur les indices du thymus et de la rate chez les souris immunosuppressives induites par le Cy sont illustrés à la figure 2. Par rapport au groupe témoin, le groupe Cy a montré une diminution significative des indices du thymus et de la rate. L’administration de LVFP a augmenté significativement ces indices d’une manière dose-dépendante. Ces résultats suggèrent que le LVFP pourrait affecter les organes immunitaires pour renforcer l’immunité.
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3.5. Effets du LVFP sur la phagocytose des neutrophiles chez des souris immunosuppressives induites par le Cy
Les neutrophiles constituent une défense efficace contre les microorganismes envahisseurs. La phagocytose est une stratégie clé pour les neutrophiles dans la destruction des agents pathogènes. Le taux phagocytaire et l’indice phagocytaire ont été examinés pour étudier l’activation des neutrophiles. Comme le montre la figure 3, par rapport au groupe témoin, le taux phagocytaire et l’indice phagocytaire du groupe Cy étaient significativement réduits, suggérant un statut immunosuppresseur. L’administration de LVFP (200 mg / kg et 400 mg / kg) a considérablement atténué ces changements. Ces résultats suggèrent que le LVFP peut améliorer la fonction phagocytaire des neutrophiles.
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3.6. Effets du LVFP sur l’immunité humorale et l’Immunité cellulaire chez les souris Immunosuppressives induites par le Cy
L’immunité humorale est essentielle pour que le corps lutte contre les tumeurs et les infections. Le taux sérique d’hémolysine peut être utilisé pour évaluer la réponse immunitaire humorale. L’hémolysine sérique a été diminuée par le traitement par Cy, et ce changement a été atténué de manière significative par le LVFP d’une manière dose-dépendante (Figure 4(a)). Une variété d’antigènes du sang peut activer les lymphocytes T. Le PHA peut agir comme un mitogène pour déclencher l’activation et la prolifération des lymphocytes T. Le test de transformation des lymphocytes T a été réalisé à l’aide de sang de souris après stimulation PHA en présence ou en absence de LVFP. Comme le montre la figure 4(b), les trois doses de LVFP ont inhibé de manière marquée la réduction induite par le Cy du taux de transformation des lymphocytes T. La réponse DTH est une réponse immunitaire médiée par les cellules T. La réponse par SRD a été évaluée en mesurant le degré de gonflement de l’oreille. Les trois doses de LVFP ont nettement atténué l’inhibition induite par le Cy dans le degré de gonflement de l’oreille (Figure 4(c)). Ces résultats suggèrent que le LVFP peut activer les lymphocytes B et T.
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3.7. Les effets du LVFP sur l’expression de l’IL-10 et du TNF-α dans le sérum de Souris immunosuppressives induites par le Cy
Cytokines sécrétées par les cellules immunitaires jouent un rôle essentiel dans la défense de l’hôte. L’IL-10 et le TNF-α sont des médiateurs inflammatoires clés. ELISA a été réalisée pour déterminer les effets du LVFP sur l’expression sérique de l’IL-10 et du TNF-α. Nos résultats ont démontré que les expressions d’IL-10 et de TNF-α, après traitement par Cy, étaient significativement diminuées. Administration de LVFP augmentation dépendante de la dose des taux d’IL-10 et de TNF-α (figure 5).
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3.8. Effets du LVFP sur le Stress oxydatif chez des souris immunosuppressives induites par le Cy
De plus, cette étude a examiné si le LVFP soulageait le stress oxydatif induit par le Cy et les lésions hépatiques. SOD convertit l’anion superoxyde en H2O2 et O2 pour prévenir et neutraliser les dommages induits par les radicaux libres. Le GSH-px est présumé être une défense endogène importante contre la destruction peroxydative de la membrane cellulaire. Le MDA est le produit final de la peroxydation lipidique et peut refléter les dommages oxydatifs dans le tissu hépatique. Les figures 6(a) -6 (c) montrent la diminution significative des expressions SOD et GSH-px, avec une augmentation des taux de MDA dans le tissu hépatique après le traitement par Cy. L’administration du LVFP dépendante de la dose a augmenté les taux de SOD et de GSH-px et a diminué le taux de MDA. Ensuite, les modifications de la morphologie du foie ont été évaluées à l’aide de la coloration HE. Comme le montre la figure 6(d), dans le groupe Cy, les cellules hépatiques étaient clairsemées et désordonnées avec le noyau pyknotique. Les sinusoïdes hépatiques étaient pleines de globules rouges. Comme prévu, les cellules hépatiques du groupe LVFP ont été disposées de manière ordonnée avec un nucléole clair, comparable à ceux du groupe témoin. Les résultats ont indiqué que le LVFP pourrait atténuer le stress oxydatif et les lésions hépatiques induites par le Cy.
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4. Discussion
Dans cette étude, un polysaccharide a été extrait du fruit Ligustrum vicaryi L., et ses activités immunomodulatrices et antioxydantes ont été évaluées. Le polysaccharide a été extrait par de l’eau chaude combinée à une extraction par ultrasons, à la précipitation de l’éthanol, à l’élimination des graisses par l’acétone, à l’élimination des pigments par la résine macroporeuse DM101, à la déprotéination avec le réactif de Sevage (chloroforme / 1-butanol, v / v = 4: 1) et à l’élimination des petites molécules à l’aide du sac de dialyse, respectivement. De plus, cette structure polysaccharidique a été caractérisée par spectroscopie infrarouge, HPGFC-RID et HPIC. Les résultats ont indiqué que le poids moléculaire du LVFP est de 88 949 Da et que le LVFP est constitué de quatre monosaccharides, à savoir le rhamnose, l’arabinose, le galactose et le glucose dans un rapport molaire de 1,79: 7,55: 4,58: 1,54.
L’immunosuppression est un état de dysfonctionnement immunitaire temporaire ou permanent qui peut rendre un organisme plus sensible aux agents pathogènes. Le développement de nouveaux agents immunomodulateurs est l’une des méthodes les plus efficaces pour la prévention et le traitement des maladies immunosuppressives. Par exemple, les agents immunomodulateurs combinés à des médicaments de chimiothérapie semblent être utiles dans le traitement du cancer. Plusieurs rapports ont indiqué des corrélations positives entre les actions immunomodulatrices et les polysaccharides. Ayeka et coll. démontré que la réglisse (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) le polysaccharide a des effets immunomodulateurs évidents par l’activation des populations de cellules immunitaires CD4+ et CD8+ et une production accrue de diverses cytokines, telles que l’IL-2, l’IL-6 et l’IL-7. Chen et coll. polysaccharides isolés de Schisandra sphenanthera et de Schisandra chinensis; ces extraits pourraient améliorer l’activité phagocytaire des macrophages et améliorer l’immunité du corps. Il a été observé que les polysaccharides de Schisandra sphenanthera et de Schisandra chinensis étaient principalement composés d’arabinose, de glucose et de galactose, similaires à la composition du LVFP. Pour étudier si le LVFP possédait des fonctions immunomodulatrices, un modèle de souris immunosupprimée induite par le Cy a été établi. Cy est un agent chimiothérapeutique et a été utilisé pour établir des modèles animaux immunosuppresseurs. Au niveau des organes immunitaires, les résultats ont indiqué que le LVFP augmentait significativement les indices de la rate et du thymus chez les souris immunosuppressives induites par le Cy. Au niveau des cellules immunitaires, il a été observé que le LVFP améliorait la fonction phagocytaire des neutrophiles et favorisait l’activation des lymphocytes B et T. Ces données indiquent que le LVFP peut améliorer l’immunité innée et adaptative.
De plus, des cytokines immunitaires dans le sérum ont également été examinées, et les résultats ont indiqué que le LVFP augmentait les taux d’IL-10 et de TNF-α. Plusieurs types de polysaccharides peuvent influencer l’expression de facteurs inflammatoires. Chen et coll. observé que les polysaccharides sulfatés de microalgues filamenteuses Tribonema sp. peut améliorer les expressions IL-6, IL-10 et TNF-α dans les macrophages. Cheng et coll. a rapporté que les polysaccharides du Lactarius deliciosus sauvage augmentaient la sécrétion de TNF-α, d’IL-1β et d’IL-6 dans les macrophages. Wang et coll. a rapporté que le polysaccharide du lichen Ombilicaria esculenta induisait la libération de TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6 et IL-10 dans les macrophages murins.
Les antioxydants sont des substances qui suppriment l’oxydation dans le corps humain. Habituellement, il existe un équilibre entre la production réactive d’espèces oxygénées et le système de défense antioxydant, indispensable dans le métabolisme normal. Les cellules produisent des antioxydants endogènes tels que le gazon et le GSH-px pour supprimer les radicaux libres excessifs. Cette étude a déterminé l’activité antioxydante du LVFP chez des souris immunosuppressives induites par le Cy. Les résultats ont démontré que le LVFP présentait une augmentation significative des expressions SOD et GSH-px. De plus, le LVFP a diminué l’expression de MDA, ce qui indique des dommages oxydatifs dans le foie. La coloration a indiqué que le LVFP peut soulager les dommages aux cellules hépatiques induits par le Cy. Ainsi, on peut conclure que le LVFP pourrait protéger les cellules des dommages induits par le stress oxydatif en améliorant la production d’antioxydants tels que le SOD et le GSH-px. Des recherches antérieures ont montré que la teneur en rhamnose, arabinose et galactose dans la composition de monosaccharides peut affecter l’activité antioxydante. La teneur en rhamnose, arabinose et galactose dans le LVFP est plus élevée, ce qui peut être important pour l’activité antioxydante plus forte démontrée par le LVFP.
Dans l’ensemble, des polysaccharides du fruit Ligustrum vicaryi L. ont été extraits et leurs caractéristiques physiques et biologiques ont été étudiées. Le LVFP pourrait être exploré comme un agent immunomodulateur et antioxydant potentiel pour une utilisation thérapeutique dans les maladies immunosuppressives, permettant l’introduction de la médecine traditionnelle chinoise sur le marché international.
5. Conclusions
En conclusion, le LVFP a été extrait et purifié du fruit Ligustrum vicaryi L. d’un poids moléculaire de 88 949 Da et se composait de quatre monosaccharides, à savoir le rhamnose, l’arabinose, le galactose et le glucose. Des études pharmacologiques préliminaires ont indiqué que le LVFP pouvait améliorer efficacement les fonctions immunitaires et avait une activité antioxydante. Cette étude démontre que le LVFP peut être un agent immunomodulateur et antioxydant prometteur pour les thérapies pharmaceutiques (figure 7).
Disponibilité des données
Les données du FIT utilisées pour étayer les résultats de cette étude sont disponibles auprès de l’auteur correspondant sur demande.
Conflits d’intérêts
Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflits d’intérêts concernant la publication de cet article.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par la Fondation Nationale des Sciences Naturelles de Chine (81800399), le Fonds de Démarrage de la Recherche Doctorale de l’Université de Médecine de Jining, le Projet de Formation à l’Innovation et à l’Entrepreneuriat des Étudiants de Niveau National (201610443011), le Programme de Développement des Sciences et des Technologies de la Médecine Traditionnelle Chinoise du Shandong (2019-0450) et le Programme de Formation à l’Innovation des Étudiants de l’Université de Médecine de Jining (2017-2018). cx2016011 / cx2019092).