Dès leur rencontre à Tarse, en Asie Mineure, après l’assassinat de César, Marc Antoine a été ébloui par Cléopâtre. Il l’a suivie jusqu’à Alexandrie. Cléopâtre lui donna des jumeaux en 40 av. Bien qu’Antoine revienne à Rome et accepte d’épouser Octavie, sœur d’Octave (plus tard appelée Auguste), il est réuni avec Cléopâtre en 37 av.j.-c. Cléopâtre et Antoine ont vécu ce que certains ont interprété comme une vie de débauche et d’indulgence. Mais ils étaient également préoccupés par la poursuite et l’extension de leur pouvoir. Quand Antoine a retrouvé Cléopâtre, il a demandé un soutien financier pour ses campagnes militaires. En retour, Cléopâtre demanda le retour d’une grande partie de l’empire d’Orient égyptien, qui avait été repris par Rome. Les campagnes militaires d’Antoine furent infructueuses, mais il fit tout de même un retour triomphal à Alexandrie en 34 av.j.-C., prêt pour la célébration over-the-top appelée « les Dons d’Alexandrie. »Les foules affluaient pour voir Cléopâtre, Antoine et leurs enfants assis sur des trônes dorés. Antoine annonça que Césarion était le fils de César, ce qui usurperait la position d’Octave dans la ligne de succession de César. Antoine et Cléopâtre ont également attribué des terres à leurs enfants, alarmant Octavien lorsqu’il a appris la nouvelle. Octavien a commencé une guerre de propagande contre le couple, convainquant les Romains qu’Antoine donnait des terres romaines à une femme étrangère et qu’il déplacerait éventuellement la capitale de Rome à Alexandrie. En conséquence, le Sénat romain a privé Antoine de son pouvoir et a déclaré la guerre à Cléopâtre. Octave vainquit les forces conjointes de Cléopâtre et d’Antoine à la bataille d’Actium (31 av.j.-c.). Antoine s’est suicidé plus tard, tout comme Cléopâtre, peut-être au moyen d’un asp. Cléopâtre avait 39 ans au moment de sa mort et était reine depuis 22 ans et partenaire d’Antoine depuis 11 ans.