21.1 Clavispora Lusitaniae Rodrigues de Miranda (1979)
Anamorph: la Candida lusitaniae van Uden & do Carmo-Sousa
Crescita su YM agar: Dopo 3 giorni a 25°C, le cellule subglobose, ovoidali allungate, 2-6×3 a 10 µm, e si verificano singolarmente, a coppie o in filiera corta. La crescita è butirrica, di colore da bianco a color crema, scintillante o occasionalmente opaca e rugosa.
Crescita in brodo di estratto di glucosio-lievito: occasionalmente la crescita può essere flocculante.
Dalmau plate culture su farina di mais agar: Dopo 1 settimana a 25°C, le pseudoiphe sono abbondanti e ben sviluppate. Le colonie possono essere orlate di pseudoiphe.
Formazione di ascospore: gli Asci sono solitamente bilobati, contenenti uno o due, raramente tre o quattro, ascospore clavate (Fig. 21.2). La coniugazione germoglio-genitore è stata osservata in un ceppo (Fig. 21.2 F). Le verruche possono (Rodrigues de Miranda 1984a) o non possono (Rodrigues de Miranda 1979) essere visibili al microscopio elettronico. Le ascospore vengono liberate dall’asci subito dopo la loro formazione. In alcune croci si formano ascospore da sferiche a ovoidi (Fig. 21.2 D). Abbondante sporulazione si verifica 2-4 giorni a 17-25°C dopo la miscelazione colture di tipi di accoppiamento compatibili su 1% estratto di malto agar o agar YCBAS. Quasi tutti gli isolati sono fertili.
Figura 21.2. Clavispora lusitaniae. (A) SUB 79-257.1×CBS 4413. B) Tubi di coniugazione e C) zigote CBS 6936×UWOPS 94-252.1. D) ascospore ovoidi, G90-244,1×G90-207,5. Ceppo automictico MTCC 1001, (E) ascus coniugato; (F) ascus autogamous; G) asci deliquescati e ascospore agglutinate. Bar=5 µm. Lachance et al. (2003c), ristampato con il permesso.
Fermentation
| Glucose | + |
| Galactose | v |
| Sucrose | v |
| Maltose | v |
| Lactose | − |
| Raffinose | − |
| Trehalose | v |
Growth (on Agar Media)
| Glucose | + |
| Inulin | − |
| Saccarosio | +1 |
| Raffinosio | − |
| Melibiose | − |
| Galattosio | v |
| Lattosio | − |
| Trealosio | + |
| Maltosio | +1 |
| Melezitose | +1 |
| Metil-α-d-glucoside | v |
| amido Solubile | − |
| Cellobiosio | v |
| Salicina | +1 |
| l-Sorbose | + |
| l-Ramnosio | + |
| d-Xilosio | + |
| l-Arabinosio | − |
| d-Arabinosio | v |
| il d-Ribosio | v |
| Metanolo | − |
| Etanolo | + |
| Glicerolo | + |
| Eritritolo | − |
| Ribitol | +1 |
| Galactitol | − |
| Mannitol | + |
| Glucitol | +1 |
| myo-Inositol | − |
| dl-Lactate | v |
| Succinate | + |
| Citrate | v |
| d-Gluconate | v |
| d-Glucosamine | v |
| N-Acetyl-d-glucosamine | +1 |
| Hexadecane | v |
| Nitrate | − |
| Vitamin-free | − |
1 Raramente negativo (ad esempio, ceppo UWOPS 92-308.1)
Additional Growth Tests and Other Characteristics
| Xylitol | + |
| 2-Keto-d-gluconate | + |
| d-Glucuronate | − |
| Glucono-δ-lactone | v |
| Amino acid-free | + |
| Nitrite | − |
| Ethylamine | + |
| Lysine | + |
| Cadaverine | + |
| 10% NaCl | + |
| 50% Glucose | v |
| Starch production | − |
| DBB | − |
| Gelatin | − |
| Casein | − |
| Tween 80 | v |
| Acid production | − |
| Cycloheximide 0.001% | +/w |
| 1% Acetico | − |
| Crescita a 30°C | + |
| la Crescita a 37°C | + |
CoQ: 8 (Yamada e Kondo 1973).
Mol % G + C: 45.1-45.7, cinque ceppi, tra cui CBS 4413 e CBS 6936 (BD: Lachance et al. 1986).
Numeri di adesione alla sequenza genica, tipo ceppo: D1 / D2 LSU rRNA = U44817, SSU rRNA = AY497762. Allotipo: D1 / D2 LSU rRNA = AY190538.
Carboidrati cellulari: Glucosio e mannosio (Suzuki e Nakase 1998).
Tipi di accoppiamento complementari: CBS 6936, tipo di accoppiamento h + e CBS 4413, tipo di accoppiamento h -.
Tipo di ceppo: CBS 6936.
Systematics: Lachance and Phaff (1998a) ha riassunto le informazioni disponibili sulla variabilità riscontrata nella specie nell’assimilazione di l-ramnosio, acido citrico e maltosio. Un isolato dall’agave frantumata, UWOPS92-308.1, la cui appartenenza alla specie è stata recentemente confermata (Lachance et al. 2003c), non ha assimilato saccarosio, α-glucosidi, β-glucosidi, ribitolo, glucono-δ-lattone e N-acetil-glucosamina. L’identificazione basata sulle caratteristiche di crescita è quindi inaffidabile. In quasi tutti i casi, C. lusitaniae è isolato sotto forma di ceppi aploidi che subiscono solo la riproduzione sessuale dopo la miscelazione con un tipo di accoppiamento compatibile. I due tipi di accoppiamento sembrano essere distribuiti equamente in natura. Il ceppo MTCC 1001 è unico nella capacità di formare asci da solo, da una miscela di coniugazione isogama e germoglio–genitore. L’appartenenza alla specie è supportata dalla sequenza D1/D2, che è identica a quella dell’allotipo. Nonostante la scoperta di un ceppo automictico, l’identificazione morfologica di C. lusitaniae è più convenientemente ottenuta accoppiando incognite con ceppi di tipi di accoppiamento noti (François et al. 2001). Sfortunatamente, l’allotipo, CBS 4413, si accoppia male. François et al. (2001) e Lachance et al. (2003c) fornire elenchi di vari ceppi e le loro efficienze di accoppiamento.
La specie è sorprendentemente polimorfica nelle grandi sequenze di subunità rDNA, che possono variare di oltre 30 sostituzioni nel dominio D2 (Lachance et al. 2003c). Tuttavia, non vi è alcuna correlazione tra la capacità di formare asci maturi accoppiando coppie e la loro estensione della divergenza di sequenza. Alcuni ceppi aploidi sono eterogenei per le sequenze varianti, indicando che questo è un caso raro in cui una specie è sostanzialmente polimorfica per questo marcatore normalmente conservato. Come un tale polimorfismo sia nato non è chiaro. Una spiegazione plausibile è che la specie è stata suddivisa allopatricamente in due popolazioni distinte per un tempo sufficiente a consentire la divergenza, ma senza lo sviluppo di un meccanismo di isolamento postzigotico. La riunificazione delle popolazioni, possibilmente attraverso la deriva continentale, avrebbe quindi permesso la coesistenza delle varianti di sequenza in un’unica popolazione mendeliana.
Ecologia: La nicchia ecologica di C. lusitaniae è mal definita. Sebbene il lievito si presenti nel cactus, non può essere considerato cactofilo, essendo stato riportato solo occasionalmente in quasi 2000 campioni (Starmer et al. 1990). Diversi ceppi sono stati recuperati da tessuto necrotico cactus in Antigua da P. F. Ganter. È interessante notare che questi campioni non hanno prodotto alcun C. opuntiae come normalmente ci si aspetterebbe da quell’habitat. In uno studio sui lieviti associati all’agave coltivata per la produzione di tequila, Lachance (1993b) ha trovato C. lusitaniae come la specie più abbondante nei marciumi acetici alla base delle foglie di questa pianta.
Biotecnologia: Sconosciuta
Agricoltura e alimentazione: Sconosciuta
Importanza clinica: La Clavispora lusitaniae viene regolarmente recuperata in campioni clinici, ma non è considerata un vero patogeno umano (Hurley et al. 1987). È stato riconosciuto per la prima volta come un organismo infettivo opportunistico da Holzschu et al. (1979), e da allora si è presentato in oltre 100 esemplari da pazienti affetti da deficienze immunitarie (Gargeya et al. 1990). Uno studio su 35 isolati clinici (Merz et al. 1992) ha rivelato che una quantità significativa di variazione nelle dimensioni dei cromosomi si verifica da clone a clone. Questi ceppi potevano essere assegnati, sulla base dei loro elettrocariotipi, a 15 gruppi corrispondenti ai 15 pazienti da cui erano stati isolati.