Abstract
Ligustrum vicaryi L. is een hybride van Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum en Ligustrum vulgale L., behorend tot de familie Oleaceae. Het wordt vaak gebruikt als sierstruik vanwege zijn gouden bladeren. De medische waarde ervan moet echter nog worden ontdekt. Onlangs hebben plantenpolysachariden uitgebreide aandacht getrokken vanwege hun biologische eigenschappen, waaronder immunomodulerende en antioxiderende activiteiten. Deze studie was gericht op het extraheren, zuiveren en karakteriseren van de polysaccharide uit het Ligustrum vicaryi L. fruit en het onderzoeken van de immunomodulerende en antioxidant activiteiten. Het Ligustrum vicaryi L. fruitpolysaccharide (lvfp) werd verkregen door ultrasone extractie, ethanolprecipitatie, macroporeuze harsscheiding en dialysezak zuivering. De fysisch-chemische eigenschappen van het LVFP werden opgehelderd met behulp van Fourier-transform infraroodspectrometrie, high-performance ionchromatografie en high-performance gel filtratiechromatografie. De resultaten gaven aan dat het lvfp bestond uit rhamnose, arabinose, galactose en glucose in een verhouding van 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54, en zijn molecuulgewicht was 88,949 Da. De immunomodulerende en antioxiderende activiteiten van het LVFP werden onderzocht met behulp van een cyclofosfamide- (Cy-) geïnduceerd immunosuppressed muismodel. De resultaten toonden aan dat de lvfp de milt-en thymusindexen significant verhoogde, de fagocytaire functie van neutrofielen, geactiveerde B-en T-lymfocyten verbeterde en de serumspiegels van IL-10 en TNF-α verhoogde. Bovendien merkten we op dat de LVFP Cy-geïnduceerde leverschade verlichtte door het verhogen van superoxide dismutase (SOD) en glutathion peroxidase (GSH-px) niveaus. Deze resultaten suggereren dat het lvfp de immunomodulerende en antioxiderende activiteiten heeft, waardoor een basis wordt gelegd voor de toepassing van het LVFP in de farmaceutische en functionele voedingsindustrie.
1.
immunomodulatoren kunnen worden gebruikt als preventieve of therapeutische strategieën, waarbij de reactie van de gastheerverdediging wordt versterkt of onderdrukt. De natuurlijke producten met immunomodulatory en antioxidant functies worden wijd gebruikt om verscheidene ziekten, met inbegrip van auto-immune ziekte, ontstekingswanorde, en kanker te behandelen . De laatste tijd is er een groeiende belangstelling voor goedkope en minder giftige natuurlijke producten over het gebruik van synthetische chemotherapeutische middelen.Ligustrum vicaryi L. is een hybride van Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum en Ligustrum vulgale L., behorend tot de familie Oleaceae . Het heeft een chlorofyl-minder fenotype en wordt veel gebruikt als tuinbouwstruik vanwege zijn gouden bladeren. Volgens de gas-uitwisseling kenmerken en chlorofyl fluorescentie reacties, Ligustrum vicaryi L. kan SO2 weerstaan en dus kan worden gebruikt voor de fytostabilisatie van Cd-verontreinigde grond . Hoewel Ligustrum vicaryi L. een hoge sier-en milieubeschermingswaarde heeft, is het therapeutisch potentieel nog niet opgehelderd.
Plantpolysachariden, een klasse van belangrijke biologische macromoleculen die gewoonlijk in traditionele geneeskrachtige kruiden worden aangetroffen, vertonen een reeks biologische activiteiten, waaronder antioxidant, immunomodulerende, antiaging -, antitumor-en ontstekingsremmende activiteiten . In de afgelopen jaren zijn er vele studies gewijd aan de extractie en bioactiviteitsanalyse van plantaardige polysachariden. Plant fruit polysachariden zijn de meest onderzochte, met inbegrip van de jujube polysachariden, persimmon polysachariden, en watermeloen polysachariden . Voor zover wij weten, is een studie gebaseerd op de bereiding en bioactiviteit van Ligustrum vicaryi L. fruit polysacchariden (LVFPs) niet gerapporteerd.
In dit onderzoek werd het LVFP geëxtraheerd en gezuiverd. Vervolgens werden het molecuulgewicht en de monosaccharidesamenstelling van het LVFP geanalyseerd. Bovendien werden de biologische functies van het lvfp beoordeeld in een cyclofosfamide- (Cy-) geïnduceerd immunosuppressed muismodel. De resultaten toonden aan dat de lvfp een immunomodulerend vermogen heeft door zowel de aangeboren als de adaptieve immuniteit te activeren. Bovendien toonde de lvfp antioxidant activiteit door het verhogen van superoxide dismutase (SOD) en glutathion peroxidase (GSH-px). Deze studie presenteerde een theoretische basis voor de ontwikkeling van het LVFP als een alternatieve therapeutische remedie voor immuungerelateerde ziekten.
2. Materialen en methoden
2.1. Dierenwelzijn en ethische verklaringen
alle experimentele procedures voldeden aan de aanbevelingen van de richtlijnen van ARRIVE (animal research: reporting in vivo experiments). De institutionele Animal Care and Use Comité van Jining Medical University goedgekeurd de procedures. Alle experimentele procedures werden zo humaan mogelijk uitgevoerd. Een totaal van 100 gezonde mannelijke Kunming muizen met een gewicht van 20-25 g werden gehuisvest onder omstandigheden die 12 uur van een donker-licht kunstmatige cyclus, met voedsel en water beschikbaar ad libitum. De dieren werden gehuisvest in standaard dierenverblijven, met een temperatuur van 20-22°C en een vochtigheid van 55-60%.
2.2. Extractie en zuivering van polysacharide
Ligustrum vicaryi L. vruchten werden verkregen uit de botanische tuin van Jining Medical University (Rizhao, Shandong, China) en geïdentificeerd door Jianan Wang (Medical Botanist, School Of Pharmacy, Jining Medical University). Gedroogde Ligustrum vicaryi L. vruchten werden verpulverd en gezeefd door een zeef met 40 mazen. Het poeder werd ondergedompeld in aceton (de verhouding van poeder tot aceton was 1 : 3) en gedurende 24 uur geschud om lipiden te verwijderen. Het supernatant werd weggegooid en de restjes werden in de oven gedroogd. Het polysacharide werd met gedestilleerd water 8 : 1 (v/w) bij 50°C gedurende 80 min geëxtraheerd met behulp van een ultrasoon vermogen van 250 W. Het waterextract werd gefilterd met behulp van katoen. Het residu werd verwijderd na centrifugeren bij 3000 toeren per minuut gedurende 3 minuten. Vervolgens werd het geconcentreerde supernatant neergeslagen met 70% ethanol, en dit proces werd herhaald met 95% ethanol. Nadat het supernatant was verwijderd, werd gedestilleerd water toegevoegd om het extract op te lossen, en het residu werd verwijderd door middel van centrifugeren. De dm101 macroporeuze hars werd gebruikt om het pigment te verwijderen. Het Sevage-reagens (chloroform / 1-butanol, v / v = 4 : 1) werd gebruikt om het eiwit te verwijderen totdat er geen verkleuringsreactie werd waargenomen met behulp van Coomassie Brilliant Blue g-250 detectie. De polysachariden werden 24 uur in een vrieshaard geplaatst om het bevroren poeder te verkrijgen. De kleine molecules in polysaccharide werden verwijderd door een dialysezak (moleculaire cutoff van 3500 Da) twee dagen te gebruiken, en gedestilleerd water werd om de 12 h vervangen. de kolomchromatografie Sephadex G-200 werd gebruikt om lvfp te zuiveren. De anthrone-zwavelzuurtest, met een glucose-standaardcurve, werd gebruikt om de zuiverheid van LVFP te bepalen.
2.3. Fourier-Transform Infrared (FTIR) analyse
het LVFP werd gemengd met zuiver kaliumbromidepoeder en het mengsel werd in een agaatmortel geplaatst en gelijkmatig gemalen onder een infraroodlamp. Het mengsel werd beoordeeld met behulp van de Fourier-transform infrarood spectrometer IRTracer-100 (Shimadzu, Japan).
2.4. High-Performance ionchromatografie (Hpic)
voor hpic-analyse werd 5 mg LVFP opgelost in 1 mL 2 mol/L trifluorazijnzuur en gedurende 2 uur bij 121°C geplaatst voor hydrolyse. Vervolgens werd het mengsel gefilterd met behulp van een 0,45 µm microporeus filtratiemembraan. De chromatografische scheiding van monosachariden werd uitgevoerd op de ICS-5000 ionchromatograaf uitgerust met een CarboPac PA20 kolom en puls ampere detector. De ionchromatografie scheidingsvoorwaarden werden aangepast en getest voor een mengsel van acht monosaccharidenormen (fucose, rhamnose, arabinose, galactose, glucose, xylose, mannose en fructose). Een superieure scheiding werd verkregen door gradiënt-elutie met een constant debiet van 0,5 mL/min. De mobiele fase bestond uit 250 mM NaOH (A), water (met 1 m NaAc%, v/v, B), en water (C). De elutie werd als volgt uitgevoerd: 2.0% A bij 0 21 21 min; 2,0% A en 5,0% B Bij 21.1 min; 2,0% A en 20% B Bij 21.1 30 30 min; en 80% A bij 30.1 50 50 min.
2.5. High-Performance Gel Filtration Chromatography (Hpgfc)
de polysaccharide moleculaire massa werd geanalyseerd door Hpgfc (Waters, New York, USA) en uitgerust met de rid (2414 brekingsindex detector) en Empower 3 werkstation. De chromatografische omstandigheden waren als volgt: chromatografische kolom: Ultra-Hydrogel™ lineair, 300 mm × 7,8 mm × 2, mobiele fase: 0,1 m NaNO3, debiet: 0,9 mL / min en kolomtemperatuur: 45°C. Het monster werd opgelost in de vloeibare fase en gefilterd door een microporeus filtratiemembraan. De molecuulgewichtnormen die voor de kalibratiekromme werden gebruikt, waren MW135350, MW36800, MW9750, MW2700 en MW180.
2.6. Cyclofosfamide – (Cy -) geïnduceerd immunosuppressief muismodel en LVFP-toediening
in totaal werden 100 muizen willekeurig verdeeld in vijf groepen: control, Cy, Cy + LVFP (100 mg/kg/dag), Cy + LVFP (200 mg/kg/dag) en Cy + LVFP (400 mg/kg/dag). De controlegroep kreeg een normale zoutoplossing toegediend en de andere vier groepen werden gedurende zeven dagen intraperitoneaal geïnjecteerd met Cy (40 mg/kg) elke dag. De LVFP werd gedurende zeven opeenvolgende dagen intragastrische toediening toegediend.
2.7. Bepaling van milt-en Thymusindexen
alle muizen werden 24 uur na de laatste toediening van het geneesmiddel gewogen en opgeofferd. De milt en de thymus werden uitgesneden en gewogen. De milt-of thymusindex werd uitgedrukt als de verhouding van het gewicht van de milt of thymus tot het lichaamsgewicht.
2.8. Bepaling van de fagocytaire functie van muizen neutrofielen
Staphylococcus aureus werd gebruikt om de fagocytose van neutrofielen te bepalen. In het kort, 40 µL bloed werd verkregen van muizen na lvfp toediening en geplaatst in een heparine buis om stolling te voorkomen. Vervolgens werd 40 µL bacteriële suspensie toegevoegd aan de bovengenoemde buis. Het mengsel werd gelijkmatig gecoat op glasplaten en op kamertemperatuur gehouden gedurende 0,5 uur. vervolgens werd het mengsel bevestigd met 2-3 druppels methanol gedurende 5 min en gekleurd met 4-5 druppels Wright ‘ s vlek gedurende 5 min. In totaal werden 100 neutrofielen waargenomen en geregistreerd. De neutrofielfagocytaire snelheid en de neutrofielfagocytaire index werden als volgt berekend: de neutrofielfagocytaire snelheid = het aantal neutrofielen dat een fagocytaire functie vertoonde/het totale aantal neutrofielen en de neutrofielfagocytaire index = het totale aantal bacteriën dat door neutrofielen was overspoeld/het totale aantal neutrofielen.
2.9. Bepaling van Serumhemolysine met ELISA
op de vierde dag werd 5% van een kiprode bloedcelsuspensie (CRBC) intraperitoneaal in muizen geïnjecteerd (0,1 mL/10 g). Op de zevende dag, 2 uur na toediening van LVFP, werd 1 mL muizenbloed verkregen en gedurende 10 minuten gecentrifugeerd. Vervolgens werd 40 µL serum toegevoegd aan 2 mL normale zoutoplossing. 1 mL 10% cavia serum en 1 mL 5% CRBC suspensie werden toegevoegd aan het serum, gevolgd door incubatie in een waterbad bij 37°C gedurende 0,5 uur. het mengsel werd gecentrifugeerd en het supernatans werd in een 96-wells kweekplaat geplaatst. De overeenkomstige optische dichtheidswaarde werd gedetecteerd door het Thermo Scientific Multiskan MK3 Enzyme Mark instrument (Waltham, MA, USA).
2.10. Bepaling van de T-Lymfocyttransformatiesnelheid
op de tweede dag werden de muizen intramusculair geïnjecteerd met 8 mg/kg fytohemagglutinine (PHA). Op de zevende dag, 2 uur na toediening van LVFP, werd 40 µL bloed verzameld uit de retroorbitale sinus, op een dia geplaatst en gekleurd met 4-5 druppels Wright ‘ s vlek. De overtollige kleurstof werd na 20 minuten met water gespoeld. Met behulp van een microscoop werden 100 cellen waargenomen. De getransformeerde lymfocyten werden als volgt berekend: lymfocyttransformatiesnelheid = getransformeerde lymfocyten/totaal aantal lymfocyten.
2.11. Vertraagde overgevoeligheidsreactie (DTH)
DTH respons werd onderzocht aan de hand van de mate van zwelling van het oor. Over het algemeen wordt aangenomen dat de mate van oorzwelling de mate van ontsteking weerspiegelt . De DTH-respons werd als volgt gemeten: op de tweede dag werd 1 cm2 abdominaal haar verwijderd met Na2S en werd de abdominale huid bedekt met 25 µL 1-fluoro-2,4-dinitrobenzeen (DNFB) – oplossing. Op de zesde dag werd de huid op het rechteroor bedekt met 20 µL dnfb-oplossing. Op de zevende dag, 2 uur na de lvfp-toediening, werden de muizen geofferd en werden de twee oren uitgesneden en gewogen. Het gewichtsverschil tussen de twee oren bepaalde de mate van zwelling van het oor.
2.12. Detectie van TNF-α en IL-10 Cytokines in Serum
op de zevende dag, 2 uur na toediening van LVFP, werd het muizenbloed verkregen met een retroorbitale sinuspunctie en op natuurlijke wijze gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur gestold. Vervolgens werd het bloed gedurende 20 minuten gecentrifugeerd en werd het supernatant verzameld. TNF-α en IL-10 in het supernatant werden gedetecteerd met behulp van ELISA kits (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China).
2.13. Detectie van Superoxide Dismutase (SOD), glutathionperoxidase (GSH-Px) en methaan Dicarbonzuuraldehyde (MDA) niveaus
op de achtste dag werden de muizen gedood en de levers geëxtraheerd. Na het malen en centrifugeren werd het supernatant van leverweefsel verzameld voor de detectie van SOD, GSH-px en MDA. SOD, GSH-px en MDA werden gemeten met behulp van ELISA kits (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China).
2.14. Hematoxyline en eosine (HE) kleuring
he kleuring werd uitgevoerd zoals eerder gemeld . Op de achtste dag werden de muizen gedood en werden leverweefsels geëxtraheerd en gefixeerd in 10% neutraal gebufferde formaline. Na het inbedden in paraffine, werden de weefsels gesneden in 5 µm secties. Daarna werden de dia ‘ s bevlekt met hem om morfologische veranderingen te bepalen. Beelden werden gefotografeerd onder een lichtmicroscoop (Olympus, Tokio, Japan).
2.15. Statistische analyse
experimentele proefpersonen/preparaten werden willekeurig in groepen ingedeeld en gelijke groepsgrootte werd verkregen. Groepsopdrachten, gegevensregistratie en gegevensanalyse werden niet bekendgemaakt aan de onderzoeker. De gegevens worden weergegeven als het gemiddelde ± SD van ten minste vijf onafhankelijke experimenten. One-way ANOVA vergezeld van Tukey ‘ s multiple-comparison test werd gebruikt voor meerdere vergelijkingen met behulp van GraphPad Prism versie 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA), en werd statistisch significant geacht.
3. Resultaten
3.1. FTIR-spectrumanalyse van LVFP
het Lvfp werd geëxtraheerd door lipideverwijdering via aceton, warm water gecombineerd met ultrageluidextractie, ethanolprecipitatie, pigmentverwijdering door macroporeuze hars, deproteïnatie met het Sevage-reagens en verwijdering van kleine moleculen door een dialysezak. Bovendien werd de nieuwe polysaccharidestructuur gekenmerkt door infrarode spectroscopie. De FTIR-spectrumanalyse van het LVFP is weergegeven in Figuur 1 (a). De karakteristieke brede piek bij 3345 cm-1 kwam overeen met de O-H (misschien inclusief N-H) stretching trilling. De absorptiepiek bij 2929 cm-1 kwam overeen met de C-H-trillingsabsorptiepiek en de suikerabsorptiepiek. De absorptie bij 1599 cm−1 gaf de buigtrillingsmodi van-OH aan. De piek bij 1412 cm-1 was het gevolg van de aanwezigheid van C-H buigtrilling. Bovendien wezen de absorpties bij 1073 cm−1 op de buigtrillingsmodi van C-O-stretching in de vorm van de alcoholische hydroxylgroep.
3.2. De monosacharidesamenstelling van LVFP
de monosacharidesamenstelling van LVFP werd geanalyseerd door HPIC. Zoals blijkt uit Figuur 1, onder b) en c), zijn alle in polysachariden aanwezige monosachariden geïdentificeerd volgens de elutietijdstip van de monosacharidenormen, onder verwijzing naar een standaardcurve. Het LVFP bestond voornamelijk uit rhamnose, arabinose, galactose en glucose in de molaire verhouding van 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.
3.3. Bepaling van het molecuulgewicht van LVFP met HPGFC
het molecuulgewicht van LVFP werd gedetecteerd door HPGFC. Dextrans (molecuulgewicht ): 180, 2700, 9750, 368000, en 135350 Da) werden gebruikt als normen omdat ze in water oplosbaar zijn en beschikbaar zijn in een breed scala van moleculaire massa ‘ s. De normen bevatten richtsnoeren voor de raming van de omvang van het LVFP. Een standaardcurve werd verkregen (y = -0,523 x + 13,01, R2 = 0,995). De resultaten toonden aan dat het molecuulgewicht van het LVFP 88.949 Da was.
3.4. Effecten van LVFP op Thymus-en Miltindexen bij Cy-geïnduceerde immunosuppressieve Muizen
het cy-geïnduceerde immunosuppressieve muismodel werd vastgesteld om de immunomodulerende activiteit van LVFP te onderzoeken. Cy werd toegediend als een Intraperitoneale injectie (40 mg/kg) elke dag gedurende zeven dagen. Na vijf dagen van CY-beleid, vertoonden de muizen symptomen zoals haarverlies, lage opwinding, agressie, slechte eetlust, en gewichtsverlies, terwijl geen duidelijke verandering in de controlegroep werd waargenomen, die erop wijzen dat het dierlijke model met succes werd gevestigd. Cy + LVFP-groepen werden gedurende zeven opeenvolgende dagen verschillende concentraties van de LVFP toegediend (100, 200 en 400 mg/kg/dag). Milt en thymus indexen weerspiegelen de immuunfuncties van het organisme . De lvfp effecten op de thymus en milt indexen bij de CY-geïnduceerde immunosuppressieve muizen zijn weergegeven in Figuur 2. In vergelijking met de controlegroep vertoonde de Cy-groep een significante afname in thymus-en miltindexen. De toediening van LVFP verhoogde deze indexen aanzienlijk op een dosisafhankelijke manier. Deze resultaten suggereren dat de lvfp de immuunorganen kan beïnvloeden om de immuniteit te versterken.
(een)
b)
(a)
b)
3.5. Effecten van LVFP op Neutrofielfagocytose bij Cy-geïnduceerde immunosuppressieve Muizen
neutrofielen zijn een effectieve verdediging tegen binnenvallende micro-organismen . Fagocytose is een belangrijke strategie voor neutrofielen in het doden van ziekteverwekkers . De fagocytaire snelheid en de fagocytaire index werden onderzocht om de activering van neutrofielen te onderzoeken . Zoals weergegeven in Figuur 3, had de Cy-groep in vergelijking met de controlegroep een significante verlaging van de fagocytaire snelheid en de fagocytaire index, wat wijst op een immunosuppressieve status. Toediening van LVFP (200 mg/kg en 400 mg/kg) verlichtte deze veranderingen significant. Deze resultaten suggereren dat de LVFP de fagocytaire functie van neutrofielen kan verbeteren.
(een)
b)
(a)
b)
3.6. Effecten van LVFP op humorale immuniteit en cellulaire immuniteit bij Cy-geïnduceerde immunosuppressieve Muizen
humorale immuniteit is van cruciaal belang voor het lichaam om tumoren en infecties te bestrijden. Het serum hemolysine niveau kan worden gebruikt om de humorale immuunrespons te evalueren . Het serum hemolysine nam af door behandeling met Cy en deze verandering werd significant afgezwakt door het LVFP op dosisafhankelijke wijze (Figuur 4(a)). Een verscheidenheid aan antigenen uit bloed kan T-lymfocyten activeren. PHA kan als mitogen dienst doen om de activering en de proliferatie van T-cellen teweeg te brengen . De T-lymfocyttransformatietest werd uitgevoerd met muizenbloed na Pha-stimulatie in aanwezigheid of afwezigheid van de LVFP. Zoals getoond in Figuur 4(b), remde alle drie de doses van de LVFP duidelijk de CY-geïnduceerde reductie van de T-lymfocyttransformatiesnelheid. De DTH-respons is een T-celgemedieerde immuunrespons . De DTH-respons werd beoordeeld door de mate van zwelling van het oor te meten. Alle drie de doses van de LVFP verzwakten duidelijk de CY-geïnduceerde remming in de mate van oorzwelling(Figuur 4 (c)). Deze resultaten suggereren dat de lvfp B-en T-lymfocyten kan activeren.
(een)
b)
c)
(a)
b)
c)
3.7. Effecten van LVFP op de expressie van IL-10 en TNF-α in het Serum van Cy-geïnduceerde immunosuppressieve Muizen
Cytokines die door immuuncellen worden uitgescheiden, spelen een vitale rol bij de verdediging van de gastheer . IL-10 en TNF-α zijn belangrijke ontstekingsmediatoren . ELISA werd uitgevoerd om de effecten van de LVFP op de serumexpressie van IL-10 en TNF-α vast te stellen. Onze resultaten toonden aan dat de IL-10-en TNF-α-uitdrukkingen, na behandeling met Cy, significant waren afgenomen. Toediening van LVFP verhoogde dosisafhankelijk de IL-10-en TNF-α-spiegels (Figuur 5).
(een)
b)
(a)
b)
3.8. Effecten van LVFP op oxidatieve Stress bij Cy-geïnduceerde immunosuppressieve Muizen
verder werd in deze studie onderzocht of de lvfp cy-geïnduceerde oxidatieve stress en leverschade verlichtte. SOD zet het superoxide anion om in H2O2 en O2 om de door vrije radicalen veroorzaakte schade te voorkomen en te neutraliseren . GSH-px wordt verondersteld een belangrijke endogene afweer tegen peroxidatieve vernietiging van het cellulaire membraan te zijn . MDA is het eindproduct van lipideperoxidatie en kan de oxidatieve schade in het leverweefsel weerspiegelen . Figuur 6 (a)-6(c) toont de significant verlaagde SOD-en GSH-px-expressies aan, met verhoogde MDA-spiegels in het leverweefsel na behandeling met Cy. Toediening van het lvfp verhoogde dosisafhankelijke SOD-en GSH-px-spiegels en verlaagde het MDA-niveau. Vervolgens werden de veranderingen in de levermorfologie beoordeeld met behulp van he kleuring. Zoals getoond in Figuur 6 (d), waren in de CY-groep de levercellen schaars en verstoord met de pyknotische kern. De hepatische sinusoïden zaten vol rode bloedcellen. Zoals verwacht werden de levercellen in de lvfp-groep ordelijk gerangschikt met een duidelijke nucleolus, vergelijkbaar met die in de controlegroep. Uit de resultaten bleek dat het LVFP de door Cy geïnduceerde oxidatieve stress en leverschade kan verminderen.
(een)
b)
c)
d)
(a)
b)
c)
d)
4. Discussie
In deze studie werd een polysaccharide geëxtraheerd uit de Ligustrum vicaryi L. vrucht, en de immunomodulerende en antioxidante werking ervan werden beoordeeld. De polysaccharide werd geëxtraheerd door heet water gecombineerd met ultrasone extractie, ethanolprecipitatie, vetverwijdering door aceton, pigmentverwijdering door macroporeuze hars DM101, deproteinering met het Sevage-reagens (chloroform/1-butanol, V/v = 4 : 1), en kleine molecuulverwijdering met behulp van de dialysezak, respectievelijk. Bovendien werd deze polysaccharidestructuur gekenmerkt door infrarode spectroscopie, HPGFC-RID en HPIC. De resultaten gaven aan dat het molecuulgewicht van het LVFP 88.949 Da is, en het lvfp bestaat uit vier monosachariden, namelijk rhamnose, arabinose, galactose en glucose in de molaire verhouding van 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.Immunosuppressie is een toestand van tijdelijke of permanente immuundisfunctie en kan een organisme gevoeliger maken voor pathogenen. Het ontwikkelen van nieuwe immunomodulerende middelen is een van de meest effectieve methoden voor de preventie en behandeling van immunosuppressieve ziekten . Bijvoorbeeld, immunomodulatory agenten gecombineerd met chemotherapiedrugs schijnen nuttig in kankertherapie te zijn . Verscheidene rapporten hebben positieve correlaties tussen de immunomodulatory acties en polysachariden aangegeven. Ayeka et al. aangetoond dat de zoethout (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) polysaccharide heeft immunomodulatory gevolgen duidelijk door de activering van CD4+ en CD8 + immune celpopulaties en verhoogde productie van diverse cytokines, zoals IL-2, IL-6, en IL-7 . Chen et al. geïsoleerde polysachariden uit Schisandra sphenanthera en Schisandra chinensis; deze extracten kunnen de fagocytaire activiteit van macrofagen verbeteren en de immuniteit van het lichaam verbeteren . Naar verluidt werden de polysachariden van Schisandra sphenanthera en Schisandra chinensis voornamelijk samengesteld uit arabinose, glucose en galactose, vergelijkbaar met de samenstelling van het LVFP. Om te onderzoeken of de LVFP immunomodulerende functies bezat, werd een cy-geïnduceerd immunosuppressed muismodel vastgesteld. Cy is een chemotherapeutisch middel en is gebruikt om immunosuppressieve diermodellen vast te stellen . Op het niveau van immuunorganen gaven de resultaten aan dat de lvfp de milt-en thymusindexen significant verhoogde bij cy-geïnduceerde immunosuppressieve muizen. Op het niveau van immuuncellen werd waargenomen dat de LVFP de fagocytaire functie van neutrofielen versterkte en de B-en T-lymfocytactivering bevorderde. Deze gegevens wijzen erop dat de lvfp zowel de aangeboren als de adaptieve immuniteit kan verbeteren.
verder werden immuungerelateerde cytokines in het serum onderzocht en de resultaten toonden aan dat de LVFP de IL-10-en TNF-α-spiegels verhoogde. Naar verluidt kunnen verschillende soorten polysacchariden de expressie van ontstekingsfactoren beïnvloeden. Chen et al. waargenomen dat gesulfateerde polysacchariden uit filamenteuze microalgen Tribonema sp. kan IL-6, IL-10 en TNF-α uitdrukkingen in macrofagen verbeteren . Cheng et al. gemeld dat polysachariden uit de wilde Lactarius deliciosus de secretie van TNF-α, IL-1β en IL-6 in macrofagen verhoogden . Wang et al. gemeld dat het polysaccharide uit de korstmossen Umbilicaria esculenta de afgifte van TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6 en IL-10 in muriene macrofagen induceerde .
antioxidanten zijn stoffen die oxidatie in het menselijk lichaam onderdrukken. Gewoonlijk is er een evenwicht tussen reactieve zuurstofspecies productie en antioxidant afweersysteem, dat onmisbaar is in normaal metabolisme. De cellen produceren sommige endogene antioxidanten zoals SOD en GSH-px om bovenmatige vrije radicalen te onderdrukken . In dit onderzoek werd de antioxidantactiviteit van het LVFP bepaald bij cy-geïnduceerde immunosuppressieve muizen. Uit de resultaten bleek dat het LVFP een aanzienlijke toename van SOD-en GSH-px-expressies vertoonde. Bovendien verminderde de LVFP de MDA-expressie, wat wijst op oxidatieve schade in de lever. Hij kleuring gaf aan dat de LVFP levercel schade veroorzaakt door Cy kan verlichten. Er kan dus worden geconcludeerd dat het LVFP cellen kan beschermen tegen door oxidatieve stress veroorzaakte schade door de productie van antioxidanten zoals SOD en GSH-px te verbeteren. Vorig onderzoek heeft aangetoond dat de inhoud van rhamnose, arabinose en galactose in de monosaccharidesamenstelling de antioxidantactiviteit kan beïnvloeden . Het gehalte aan rhamnose, arabinose en galactose in het LVFP is hoger, wat belangrijk kan zijn voor de sterkere antioxidantactiviteit die door het LVFP wordt aangetoond.
over het geheel genomen werden polysachariden uit de Ligustrum vicaryi L.-vruchten geëxtraheerd en werden hun fysische en biologische kenmerken onderzocht. Het LVFP kan worden onderzocht als een potentieel immunomodulerend en antioxidant middel voor therapeutisch gebruik bij immunosuppressieve ziekten, waardoor traditionele Chinese geneeskunde op de internationale markt kan worden geïntroduceerd.
5. Conclusies
het LVFP werd geëxtraheerd en gezuiverd uit de Ligustrum vicaryi L.-vrucht met een molecuulgewicht van 88.949 Da en bestond uit vier monosachariden, namelijk rhamnose, arabinose, galactose en glucose. Voorlopige farmacologische studies toonden aan dat de lvfp de immuunfuncties effectief kon verbeteren en een antioxiderende werking had. Deze studie toont aan dat het LVFP een veelbelovend immunomodulerend en antioxidant middel kan zijn voor farmaceutische therapieën (Figuur 7).
beschikbaarheid van gegevens
de TIF-gegevens die ter ondersteuning van de bevindingen van deze studie zijn gebruikt, zijn op verzoek verkrijgbaar bij de overeenkomstige auteur.
belangenconflicten
de auteurs verklaren dat er geen belangenconflicten zijn met betrekking tot de publicatie van dit artikel.
Dankbetuigingen
dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (81800399), het Jining Medical University doctoral Research Startup Fund, Het Fund for national-Level College Students’ Innovation and Entrepreneurship Training Project (201610443011), het Shandong Traditional Chinese Medicine Science and Technology Development Program (2019-0450), en het Jining Medical University Student Innovation Training Program (cx2016011/cx2019092).