Resumo
Ligustrum vicaryi L. é um híbrido de Ligustrum ovalifolium Hassk. variavel. aureo-marginatum e Ligustrum vulgale L., pertencentes à família Oleaceae. É frequentemente usado como um arbusto ornamental devido às suas folhas douradas. No entanto, o seu valor médico ainda não foi descoberto. Recentemente, os polissacáridos vegetais têm atraído grande atenção devido às suas propriedades biológicas, incluindo actividades imunomodulatórias e antioxidantes. Este estudo visava extrair, purificar e caracterizar o polissacarídeo da fruta Ligustrum vicaryi L. e investigar as suas actividades imunomodulatórias e antioxidantes. O Polissacárido frutícola Ligustrum vicaryi L. (LVFP) foi obtido por extração ultrassônica, precipitação de etanol, separação de resina macroporosa e purificação de saco de diálise. The physicochemical properties of the LVFP were elucidated using Fourier-transform infrared spectrometry, high-performance ion chromatography, and high-performance gel filtration chromatography. Os resultados indicaram que o LVFP consistia de ramnose, arabinose, galactose e glicose em uma razão de 1,79 : 7.55 : 4.58 : 1.54, e seu peso molecular era 88,949 Da. As actividades imunomodulatórias e antioxidantes do LVFP foram investigadas utilizando um modelo de ratinho imunossuprimido induzido pela ciclofosfamida (Cy). Os resultados demonstraram que o LVFP aumentou significativamente os índices de baço e timo, aumentou a função fagocítica dos neutrófilos, linfócitos B E T activados e os níveis séricos de IL-10 e TNF-α. Além disso, observamos que o LVFP aliviou os danos hepáticos induzidos pelo Cy, aumentando os níveis de superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GSH-px). Estes resultados sugeriram que o LVFP tem as atividades imunomodulatórias e antioxidantes, portanto, estabelecendo uma base para a aplicação do LVFP nas indústrias farmacêuticas e funcionais de alimentos.
1. Introdução os imunomoduladores podem ser usados como estratégias preventivas ou terapêuticas, potenciando ou suprimindo a resposta de defesa do hospedeiro. Produtos naturais com funções imunomodulatórias e antioxidantes são amplamente utilizados para tratar várias doenças, incluindo doença autoimune, doença inflamatória e câncer . Recentemente, tem havido um interesse crescente em produtos naturais baratos e menos tóxicos sobre o uso de agentes quimioterapêuticos sintéticos.Ligustrum vicaryi L. é um híbrido do Ligustrum ovalifolium Hassk. variavel. aureo-marginatum e Ligustrum vulgale L., pertencentes à família Oleaceae . Apresenta um fenótipo sem clorofila e é amplamente utilizado como um arbusto hortícola devido às suas folhas douradas. De acordo com as características de troca de gás e respostas de fluorescência Clorofila, Ligustrum vicaryi L. pode resistir ao SO2 e, portanto, pode ser usado para a fitoestabilização de solo contaminado com Cd . Embora a Ligustrum vicaryi L. tenha um elevado valor de protecção ornamental e ambiental, o seu potencial terapêutico ainda não foi elucidado.
polissacáridos vegetais, uma classe de importantes macromoléculas biológicas comumente encontradas em ervas medicinais tradicionais, exibem uma gama de atividades biológicas incluindo antioxidantes, imunomodulatórias, antiaging, antitumor e atividades anti-inflamatórias . Nos últimos anos, tem havido muitos estudos dedicados à extração e bioatividade de polissacáridos vegetais. Polissacáridos de frutos vegetais são os mais comumente pesquisados, incluindo os polissacáridos de jujuba , polissacáridos de persimmon e polissacáridos de melancia . Tanto quanto é do nosso conhecimento, não foi comunicado um estudo baseado na preparação e bioactividade dos polissacáridos frutícolas Ligustrum vicaryi L. (LVFPs).
neste estudo, o LVFP foi extraído e purificado. Em seguida, o peso molecular e a composição monossacarídica do LVFP foram analisados. Além disso, as funções biológicas do LVFP foram avaliadas num modelo de ratinho imunossuprimido induzido pela ciclofosfamida (Cy). Os resultados demonstraram que o LVFP tem capacidade imunomodulatória activando a imunidade inata e adaptativa. Além disso, a LVFP demonstrou actividade antioxidante ao aumentar a superóxido dismutase (SOD) e a glutationa peroxidase (GSH-px). Este estudo apresentou uma base teórica para o desenvolvimento do LVFP como um remédio terapêutico alternativo para doenças imunes relacionadas.
2. Materiais e métodos
2.1. Bem-estar dos animais e declarações éticas
todos os procedimentos experimentais obedeceram às recomendações das orientações do programa Reach (animal research: reporting in vivo experiments). O Comitê Institucional de Cuidados com animais e uso da Universidade Médica de formação aprovou os procedimentos. Todos os procedimentos experimentais foram realizados o mais humanamente possível. Um total de 100 ratos machos saudáveis com peso de 20-25 g foram alojados em condições que mantinham 12 h de um ciclo artificial escuro-claro, com alimentos e água disponíveis ad libitum. Os animais foram alojados em salas padrão de animais, com uma temperatura de 20-22°C e umidade de 55-60%.
2.2. Extracção e purificação de polissacárido
Ligustrum vicaryi L. os frutos foram obtidos do Jardim Botânico da Universidade de Medicina de Jining (Rizhao, Shandong, China) e identificados por Jianan Wang (médico botânico, Escola de Farmácia, Universidade de Medicina de Jining). Os frutos secos do Ligustrum vicaryi L. foram pulverizados e peneirados através de uma peneira de 40 malhas. O pó foi imerso em acetona (a relação entre o pó e a acetona foi de 1 : 3) e agitado durante 24 h para remover lípidos. O sobrenadante foi descartado e os restos foram secos no forno. O polissacárido foi extraído com água destilada 8 : 1 (v/w) a 50 ° C durante 80 minutos, utilizando uma potência ultrassónica de 250 W. O extracto de água foi filtrado com algodão. O resíduo foi removido após centrifugação a 3000 rpm durante 3 minutos. Em seguida, o sobrenadante concentrado foi precipitado com 70% de etanol, e este processo foi repetido com 95% de etanol. Após a remoção do sobrenadante, foi adicionada água destilada para dissolver o extracto e o resíduo foi removido por centrifugação. A resina macroporosa DM101 foi usada para remover o pigmento. Reagente de Sevage (clorofórmio / 1-butanol, v / v = 4 : 1) foi utilizado para remover a proteína até não ter sido observada qualquer reacção de descoloração com a detecção de Coomassie azul brilhante G-250. Os polissacáridos foram colocados em um secador de congelação por 24 h para obter o pó congelado. As pequenas moléculas do polissacarídeo foram removidas usando um saco de diálise (corte molecular de 3500 Da) por dois dias, e água destilada foi substituída a cada 12 h. cromatografia em coluna Sephadex G-200 foi usada para purificar o LVFP. O ensaio com ácido Antrona-sulfúrico, com uma curva padrão de glicose, foi usado para determinar a pureza do LVFP.
2.3. Análise infravermelha transformada de Fourier (FTIR)
a LVFP foi misturada com pó puro de brometo de potássio, e a mistura foi colocada em uma argamassa Agata e moída uniformemente sob uma lâmpada infravermelha. A mistura foi avaliada usando o espectrômetro infravermelho infravermelho de Fourier-100 (Shimadzu, Japão).
2.4. Cromatografia iónica de alta resolução (HPIC)
para análise HPIC, 5 mg LVFP foi dissolvido em 1 mL de ácido trifluoroacético de 2 mol/L e colocado a 121°C durante 2 h para hidrólise. Em seguida, a mistura foi filtrada usando uma membrana de filtração microporosa de 0,45 µm. A separação cromatográfica dos monossacáridos foi realizada na cromatografia iónica ICS-5000 equipada com uma coluna de CarboPac PA20 e um detector de amperes de impulso. As condições de separação cromatográfica iónica foram ajustadas e testadas para uma mistura de oito normas monossacáridas (fucose, ramnose, arabinose, galactose, glucose, xilose, manose e frutose). Uma separação superior foi obtida por eluição gradiente com um caudal constante de 0, 5 mL/min. A fase móvel consistia em 250 mM NaOH (a), água (contendo 1 M NAAC%, v/v, B) e água (C). A eluição foi efectuada da seguinte forma: 2.0% a a 0∼21 min; 2, 0% a e 5, 0% B a 21, 1 min; 2, 0% a e 20% b a 21, 1 30 30 min; e 80% a a 30, 1 50 50 min.
2.5. Cromatografia de Filtração em Gel de alta resolução (HPGFC)
a massa molecular polissacárida foi analisada pela HPGFC (Waters, New York, USA) e equipada com o detector rid (2414 refractive index detector) e o Empower 3 workstation. As condições cromatográficas são as seguintes: coluna cromatográfica: Ultra-hidrogel™ Linear, 300 mm × 7,8 mm × 2, fase móvel: 0,1 M NaNO3, caudal: 0,9 mL / min e temperatura da coluna: 45 ° C. A amostra foi dissolvida na fase líquida e filtrada por uma membrana de filtração microporosa. Os padrões de peso Molecular utilizados para a curva de calibração foram MW135350, MW36800, MW9750, MW2700 e MW180.
2.6. Ciclofosfamida (Cy-) Induzida Imunossupressores Modelo de Mouse e LVFP de Administração
Um total de 100 ratos foram divididos aleatoriamente em cinco grupos: controle, Cy, Cy + LVFP (100 mg/kg/dia), Cy + LVFP (200 mg/kg/dia), e Cy + LVFP (400 mg/kg/dia). O grupo de controlo recebeu soro fisiológico normal e os outros quatro grupos foram injectados por via intraperitoneal com cy (40 mg/kg) todos os dias durante sete dias. O LVFP foi administrado por administração intragástrica durante sete dias consecutivos.
2.7. Determinação dos índices de baço e Timo
todos os ratinhos foram pesados e sacrificados 24 horas após a última administração do fármaco. O baço e o timo foram excisados e pesados. O índice de baço ou timo foi expresso como a relação entre o peso do baço ou timo e o peso do corpo.
2.8. A determinação da função fagocítica dos neutrófilos de Ratinho
Staphylococcus aureus foi utilizada para avaliar a fagocitose dos neutrófilos. Em resumo, foram obtidos 40 µL de sangue de ratinhos após a administração de LVFP e colocados num tubo de heparina para prevenir a coagulação. Em seguida, foram adicionados 40 µL de suspensão bacteriana ao tubo acima mencionado. A mistura foi uniformemente revestida em lâminas de vidro e mantida à temperatura ambiente durante 0,5 h. Depois, a mistura foi fixada com 2-3 gotas de metanol durante 5 minutos e manchada com 4-5 gotas da mancha de Wright durante 5 minutos. Foi observado e registado um total de 100 neutrófilos. Os neutrófilos fagocitárias taxa e os neutrófilos fagocitárias índice foi calculado como segue: os neutrófilos fagocitárias taxa = o número de neutrófilos apresentada fagocitárias função/número total de neutrófilos e os neutrófilos fagocitárias índice = número total de bactérias, que havia sido atingida por neutrófilos/número total de neutrófilos.
2.9. Determinação da hemolisina sérica por ELISA
no quarto dia, 5% de uma suspensão de glóbulos vermelhos de frango (CRBC) foi injectada intraperitonealmente nos ratinhos (0, 1 mL/10 g). No sétimo dia, 2 horas após a administração de LVFP, 1 mL de sangue de ratinhos foi obtido e centrifugado durante 10 minutos. Em seguida, adicionaram-se 40 µL de soro a 2 mL de solução salina normal. Adicionaram-se ao soro um ml de soro de cobaia a 10% e 1 mL de suspensão CRBC a 5%, seguido de incubação num banho de água a 37°C durante 0,5 h. centrifugou-se a mistura e colocou-se o sobrenadante numa placa de cultura de 96 alvéolos. O valor de densidade óptica correspondente foi detectado pelo instrumento de marcação enzimática Multiskana Multiskan científico (Waltham, MA, EUA).
2.10. Determinação da taxa de transformação dos linfócitos T
no segundo dia, os ratinhos foram injectados por via intramuscular 8 mg/kg de fitohemaglutinina (PHA). No sétimo dia, 2 horas após a administração de LVFP, 40 µL de sangue foi coletado do seio retroorbital, colocado em um escorrega, e manchado com 4-5 gotas da mancha de Wright. O excesso de tinta foi enxaguado com água após 20 minutos. Utilizando um microscópio, foram observadas 100 células. Os linfócitos transformados foram calculados da seguinte forma: taxa de transformação de linfócitos = linfócitos transformados/número total de linfócitos.
2.11. A resposta de hipersensibilidade de tipo retardado (DTH)
DTH foi examinada pelo grau de tumefacção da orelha. Geralmente, acredita-se que o grau de inchaço do ouvido reflete o grau de inflamação . A resposta DTH foi medida da seguinte forma: no segundo dia, foi removido 1 cm2 de cabelo abdominal utilizando Na2S e a pele abdominal foi coberta com 25 µL de solução de 1-fluoro-2,4-dinitrobenzeno (DNFB). No sexto dia, a pele no ouvido direito foi revestida com 20 µL de solução de DNFB. No sétimo dia, 2 horas após a administração do LVFP, os ratos foram sacrificados e os dois ouvidos foram excisados e pesados. A diferença de peso entre as duas orelhas determinou o grau de inchaço da orelha.
2.12. Detecção de citoquinas TNF-α e IL-10 no soro
no sétimo dia, 2 h após a administração de LVFP, o sangue do Ratinho foi obtido utilizando uma punção sinusal retroorbital e coagulado naturalmente durante 15 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, o sangue foi centrifugado durante 20 minutos, e o sobrenadante foi coletado. TNF-α e IL-10 no sobrenadante foram detectados utilizando kits ELISA (Instituto de Bioengenharia Nanjing Jiancheng, Nanjing, China).
2.13. Detecção de superóxido Dismutase (SOD), glutationa Peroxidase (GSH-Px) e metano aldeído dicarboxílico (MDA) níveis
no oitavo dia, os ratos foram sacrificados e os fígados foram extraídos. Após trituração e centrifugação, recolheu-se o sobrenadante do tecido hepático para detecção de SOD, GSH-px e MDA. SOD, GSH-px e MDA foram medidos usando kits ELISA (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China).
2.14. Hematoxilina e eosina (HE) coloração
ele coloração foi realizada como anteriormente relatado . No oitavo dia, os ratos foram sacrificados e os tecidos hepáticos foram extraídos e fixados em formalina neutra a 10%. Após incorporação na parafina, os tecidos foram cortados em secções de 5 µm. Então, os diapositivos foram manchados com ele para determinar mudanças morfológicas. Imagens foram fotografadas sob um microscópio de luz (Olympus, Tóquio, Japão).
2.15. Análises estatísticas
indivíduos/preparações experimentais foram distribuídos aleatoriamente a grupos, tendo-se obtido tamanhos de grupo iguais. Atribuições de grupo, registro de dados e análise de dados não foram divulgados ao investigador. Os dados são apresentados como a média ± DP de, pelo menos, cinco experiências independentes. ANOVA de Sentido Único acompanhada pelo teste de múltiplas comparações de Tukey foi usado para várias comparações usando GraphPad Prism versão 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, EUA) , e foi considerado estatisticamente significante.
3. Resultados
3.1. A análise do espectro FTIR da LVFP
a LVFP foi extraída por remoção de lípidos através de acetona, água quente combinada com extração ultrassom, precipitação de etanol, remoção de pigmentos por resina macroporosa, desproteinação com o reagente Sevage, e remoção de pequenas moléculas por um saco de diálise, respectivamente. Além disso, a nova estrutura polissacárida foi caracterizada por espectroscopia infravermelha. A análise do espectro FTIR da LVFP é mostrada na Figura 1 (a). O pico largo característico de 3345 cm – 1 correspondia à vibração de Alongamento O-H (talvez incluindo n-H). O pico de absorção a 2929 cm−1 correspondia ao Pico de absorção de vibrações de alongamento C-H e ao Pico de absorção de açúcar. A absorção a 1599 cm – 1 indicou os modos de vibração de flexão de-OH. O pico de 1412 cm – 1 resultou da presença de vibrações de flexão C-H. Além disso, as absorções a 1073 cm−1 indicavam os modos de vibração de flexão de C-O que se esticava na forma do grupo hidroxilo alcoólico.
3.2. A composição monossacarídica do LVFP
as composições monossacarídicas do LVFP foram analisadas pela HPIC. Como indicado nas Figuras 1 b) e 1 c), todos os monossacáridos existentes em polissacáridos foram identificados de acordo com o tempo de eluição das normas monossacáridas, com referência a uma curva-padrão. O LVFP era composto principalmente de ramnose, arabinose, galactose e glicose na razão molar de 1,79 : 7.55 : 4.58 : 1.54.
3.3. Determination of Molecular Weight of LVFP by HPGFC
The molecular weight of the LVFP was detected by HPGFC. Dextrano (peso molecular: 180, 2700, 9750, 368000 e 135350 Da) foram usados como padrões, uma vez que são solúveis em água e estão disponíveis em uma ampla gama de massas moleculares. As normas forneceram orientações sobre a estimativa da dimensão da LVFP. Foi obtida uma curva padrão (y = – 0, 523 x + 13, 01, R2 = 0, 995). Os resultados demonstraram que o peso molecular do LVFP era de 88,949 Da.
3.4. Efeitos do LVFP nos índices de Timo e baço em ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy
o modelo de ratinho imunossuprimido pelo Cy foi estabelecido para investigar a actividade imunomodulatória do LVFP. O Cy foi administrado por injecção intraperitoneal (40 mg/kg) todos os dias durante sete dias. Após cinco dias de administração do Cy, os ratos exibiram sintomas tais como perda de cabelo, baixa excitação, agressão, mau apetite e perda de peso, enquanto que nenhuma mudança óbvia foi observada no grupo de controle, indicando que o modelo animal foi estabelecido com sucesso. Os grupos Cy + LVFP foram administrados diferentes concentrações do LVFP (100, 200 e 400 mg / kg / dia) por sete dias consecutivos. Os índices de baço e timo refletem as funções imunitárias do organismo . Os efeitos do LVFP nos índices de timo e baço nos ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy são apresentados na Figura 2. Em comparação com o grupo de controle, o Grupo Cy apresentou uma diminuição significativa nos índices de timo e baço. A administração do LVFP aumentou significativamente estes índices de forma dependente da dose. Estes resultados sugeriram que o LVFP poderia afetar os órgãos imunológicos para aumentar a imunidade.
(a)
b)
(a)
b)
3.5. Os efeitos do LVFP na fagocitose neutrófilos em ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy
os neutrófilos são uma defesa eficaz contra os microrganismos invasores . A fagocitose é uma estratégia chave para os neutrófilos na matança de patógenos . A taxa fagocítica e o índice fagocítico foram examinados para investigar a ativação dos neutrófilos . Como mostrado na Figura 3, em comparação com o grupo controle, o grupo Cy reduziu significativamente a taxa fagocítica e o índice fagocítico, sugerindo um estado imunossupressor. A administração de LVFP (200 mg/kg e 400 mg/kg) aliviou significativamente estas alterações. Estes resultados sugerem que o LVFP pode melhorar a função fagocítica dos neutrófilos.
(a)
b)
(a)
b)
3.6. Efeitos do LVFP na imunidade Humoral e na imunidade celular em ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy
a imunidade Humoral é fundamental para o organismo combater tumores e infecções. O nível sérico de hemolisina pode ser usado para avaliar a resposta imunitária humoral . A hemolisina sérica foi diminuída pelo tratamento com Cy, e esta alteração foi atenuada significativamente pelo LVFP de forma dependente da dose (Figura 4(a)). Uma variedade de antigénios do sangue podem activar linfócitos T. PHA pode agir como um mitogênio para desencadear a ativação e proliferação de células T. O ensaio de transformação de linfócitos T foi realizado utilizando sangue de ratinho após estimulação da APP na presença ou ausência do LVFP. Como demonstrado na Figura 4 (b), as três doses do LVFP inibiram marcadamente a redução induzida pelo Cy da taxa de transformação de linfócitos T. A resposta DTH é uma resposta imunitária mediada pelas células T. A resposta DTH foi avaliada medindo o grau de inchaço da orelha. As três doses do LVFP atenuaram marcadamente a inibição induzida pelo Cy no grau de inchaço do ouvido [Figura 4 (C)]. Estes resultados sugerem que o LVFP pode ativar linfócitos B e T.
(a)
b)
(c)
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(b)
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3.7. Efeitos do LVFP na expressão da IL-10 e do TNF-α no soro de ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy
as citocinas secretadas pelas células imunitárias desempenham papéis vitais na defesa do hospedeiro . IL-10 e TNF-α são os principais mediadores inflamatórios . ELISA foi realizada para determinar os efeitos do LVFP na expressão sérica de IL-10 e TNF-α. Os nossos resultados demonstraram que as expressões IL-10 e TNF-α, após o tratamento com Cy, foram significativamente reduzidas. A administração de LVFP aumentou os níveis de IL-10 e de TNF-α em função da dose (Figura 5).
(a)
b)
(a)
b)
3.8. Efeitos do LVFP sobre o Stress oxidativo em ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy
além disso, este estudo investigou se o LVFP aliviou o stress oxidativo induzido pelo Cy e os danos hepáticos. SOD converte o anião superóxido em H2O2 e O2 para prevenir e neutralizar os danos induzidos por radicais livres . Presume-se que o GSH-px é uma importante defesa endógena contra a destruição peroxidante da membrana celular . A MDA é o produto final da peroxidação lipídica e pode reflectir os danos oxidativos no tecido hepático . As figuras 6(a)-6(C) demonstram a diminuição significativa das expressões SOD e GSH-px, com o aumento dos níveis de MDA no tecido hepático após o tratamento com Cy. A administração do LVFP aumentou, em função da dose, os níveis de SOD e GSH-px e diminuiu o nível de MDA. Em seguida, as alterações na morfologia hepática foram avaliadas usando coloração. Como demonstrado na Figura 6 (d), no grupo Cy, as células hepáticas eram esparsas e desordenadas com o núcleo pyknotic. Os sinusóides hepáticos estavam cheios de glóbulos vermelhos. Como esperado, as células hepáticas do grupo LVFP foram organizadas de forma ordenada com um nucleolus claro, comparável aos do grupo controle. Os resultados indicaram que o LVFP poderia atenuar o stress oxidativo e danos hepáticos induzidos pelo Cy.
(a)
b)
(c)
d)
(a)
(b)
(c)
d)
4. Discussão
neste estudo, foi extraído um polissacárido do Ligustrum vicaryi l. fruit, e as suas actividades imunomodulatórias e antioxidantes foram avaliadas. O polissacarídeo foi extraído pela água quente combinado com ultra-som de extração, etanol precipitação, remoção de gordura, por acetona, remoção do pigmento por DM101 macroporous resina, deproteination com o Sevage reagente (clorofórmio/1-butanol, v/v = 4 : 1), e a pequena molécula de remoção, usando o saco de diálise, respectivamente. Além disso, esta estrutura polissacarídica foi caracterizada por espectroscopia infravermelha, HPGFC-RID e HPIC. Os resultados indicaram que o peso molecular do LVFP é 88,949 Da, e o LVFP consiste em quatro monossacarídeos, ou seja, ramnose, arabinose, galactose e a glicose em uma proporção molar de 1,79 : 7.55 : 4.58 : 1.54.
a imunossupressão é um estado de disfunção imune temporária ou permanente e pode tornar um organismo mais sensível a patógenos. O desenvolvimento de novos agentes imunomoduladores é um dos métodos mais eficazes para a prevenção e tratamento de doenças imunossupressoras . Por exemplo, os agentes imunomoduladores combinados com medicamentos de quimioterapia parecem ser úteis na terapia contra o cancro . Vários relatórios indicaram correlações positivas entre as acções imunomodulatórias e os polissacáridos. Ayeka et al. demonstrou que o alcaçuz (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) o polissacárido tem efeitos imunomodulatórios evidentes através da activação de populações de células imunitárias CD4+ e CD8+ e aumento da produção de várias citoquinas, tais como IL-2, IL-6 e IL-7 . Chen et al. polissacáridos isolados de Schisandra sphenanthera e Schisandra chinensis; estes extractos podem aumentar a actividade fagocítica dos macrófagos e melhorar a imunidade do corpo . Alegadamente, observou-se que os polissacáridos de Schisandra sphenanthera e Schisandra chinensis eram principalmente compostos de arabinose, glucose e galactose, semelhantes à composição do LVFP. Para investigar se o LVFP possuía funções imunomodulatórias, foi estabelecido um modelo de rato imunossuprimido induzido pelo Cy. O Cy é um agente quimioterapêutico e foi utilizado para estabelecer modelos animais imunossupressores . Ao nível dos órgãos imunológicos, os resultados indicaram que o LVFP aumentou significativamente os índices de baço e timo em ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy. Ao nível das células imunitárias, observou-se que o LVFP aumentou a função fagocítica dos neutrófilos e promoveu a ativação de linfócitos B e T. Estes dados indicam que o LVFP pode melhorar a imunidade inata e adaptativa.
além disso, foram também examinadas citoquinas imunes no soro, e os resultados indicaram que o LVFP aumentou os níveis IL-10 e TNF-α. Alegadamente, vários tipos de polissacáridos podem influenciar a expressão de factores inflamatórios. Chen et al. observed that sulfated polysaccharides from filamentous microalgae Tribonema sp. pode melhorar as expressões IL-6, IL-10 e TNF-α em macrófagos . Cheng et al. relatou que os polissacáridos do deliciosus Lactarius Selvagem aumentaram a secreção de TNF-α, IL-1β e IL-6 nos macrófagos . Wang et al. relatou que o polissacárido do líquen Umbilicaria esculenta induziu a libertação de TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6 e IL-10 em macrófagos murinos .
os antioxidantes são substâncias que suprimem a oxidação no corpo humano. Normalmente, há um equilíbrio entre a produção de espécies reativas de oxigênio e o sistema de defesa antioxidante, que é indispensável no metabolismo normal. As células produzem alguns antioxidantes endógenos, tais como SOD e GSH-px, para suprimir radicais livres excessivos . Este estudo determinou a actividade antioxidante do LVFP em ratinhos imunossupressores induzidos pelo Cy. Os resultados demonstraram que o LVFP exibia um aumento significativo nas expressões SOD e GSH-px. Além disso, o LVFP diminuiu a expressão MDA, o que é indicativo de danos oxidativos no fígado. Ele coloração indicou que o LVFP pode aliviar os danos das células hepáticas induzidas pelo Cy. Assim, pode concluir-se que o LVFP pode proteger as células de danos causados pelo stress oxidativo, aumentando a produção de antioxidantes, tais como SOD e GSH-px. Pesquisas anteriores mostraram que o conteúdo de ramnose, arabinose e galactose na composição monossacárida pode afetar a atividade antioxidante . O conteúdo de ramnose, arabinose e galactose no LVFP é maior, o que pode ser importante para a atividade antioxidante mais forte demonstrada pelo LVFP.
globalmente, foram extraídos polissacáridos do Ligustrum vicaryi l. frutos e investigadas as suas características físicas e biológicas. O LVFP poderia ser explorado como um potencial agente imunomodulatório e antioxidante para uso terapêutico em doenças imunossupressoras, permitindo a introdução da Medicina Tradicional Chinesa no mercado internacional.
5. Conclusões
em conclusão, o LVFP foi extraído e purificado do fruto Ligustrum vicaryi L. com um peso molecular de 88,949 Da e consistia em quatro monossacáridos, nomeadamente, ramnose, arabinose, galactose e glucose. Estudos farmacológicos preliminares indicaram que o LVFP poderia efetivamente melhorar as funções imunitárias e tinha atividade antioxidante. Este estudo demonstra que o LVFP pode ser um agente imunomodulador promissor e antioxidante para terapias farmacêuticas (Figura 7).
disponibilidade de dados
os dados TIF utilizados para apoiar os resultados deste estudo estão disponíveis junto do autor correspondente, mediante pedido.
conflitos de interesses
os autores declaram que não existem conflitos de interesses relativamente à publicação deste artigo.
reconhecimentos
este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81800399), pelo Fundo para inovação e treinamento de empreendedorismo de Estudantes Universitários de Nível Nacional (201610443011), pelo programa tradicional chinês de Ciência da medicina e Desenvolvimento Tecnológico (2019-0450) e pelo Programa de formação de inovação de estudantes de Medicina Universitária médica (Cx2016011/cx2019092).