2.1.1 c-Myc modelos transgênicos
O protooncogene c-myc codifica um de 62 kDa multifuncional, nuclear phosphoprotein, e está localizado no cromossomo 8q24.21 em seres humanos. c-Myc funciona como um fator de transcrição que ativa a expressão de um número de genes necessários para a progressão do ciclo celular da fase G1 para S. Paradoxalmente, a expressão c-Myc também pode promover fortemente a morte de células apoptóticas. a expressão C-Myc aumenta durante a proliferação relacionada com a gravidez na glândula mamária normal. No entanto, está ausente em células alveolares diferenciadas durante a lactação, mas aumenta novamente durante o processo normal de involução mamária apoptótica (Liao & Dickson, 2000). Em tumores humanos, a desregulamentação da expressão c-myc pode ocorrer através de múltiplos mecanismos. O c-myc gene é amplificado em cerca de 16% e reorganizados em cerca de 5% dos humanos cancro da mama, enquanto o c-Myc proteína é overexpressed em 45-70% dos humanos cancros da mama (Blackshear, 2001; Deming, Nass, Dickson, & Trock, 2000; Spandidos, Campo, Agnantis, Evan, & Moore, 1989). A amplificação da C-myc correlaciona-se com o mau prognóstico do paciente (Deming et al., 2000).
a activação da C-myc tem sido implicada como um passo crítico no desenvolvimento de carcinoma mamário tanto em seres humanos como em ratos. O Leder laboratório desenvolvido MMTV-c-myc ratos transgênicos que expressam c-myc especificamente nas glândulas mamárias em níveis elevados em ratos do sexo feminino, e nas glândulas salivares dos homens e mulheres com níveis mais baixos (Stewart et al., 1984). Estes ratos desenvolvem adenocarcinomas mamários em animais multiparosos com uma incidência de 100%. Dada a capacidade de resposta hormonal do promotor MMTV, não é surpreendente que a incidência e latência do tumor depende do número de gravidezes. Em mulheres multipares, os adenocarcinomas desenvolvem – se normalmente aos 5 a 6 meses de idade e correspondem à segunda ou terceira gravidez. Tumores metastáticos são raros, mas foram observados no pulmão. Não se observam tumores em ratos machos (Stewart et al., 1984).Os ratos transgénicos que exprimem c-myc sob o controlo do promotor do WAP Murino foram também gerados por dois grupos independentes (Sandgren et al., 1995; Schoenenberger et al., 1988). A frequência de tumores em ratos WAP-c-myc era muito maior do que a do seu homólogo movido por MMTV. Ratinhos fêmeas WAP-c-myc começam a desenvolver tumores mamários dentro de 2 meses após o início da expressão transgênica (gravidez). Aproximadamente 80% das fêmeas desenvolvem tumores palpáveis após duas rondas de Gravidez, e ratos individuais frequentemente desenvolvem tumores múltiplos que afetam uma única ou múltiplas glândulas (Schoenenberger et al., 1988). Os ratos Virgens não desenvolvem tumores (monitorizados até 14 meses). Os ratos WAP-c-myc formam tumores mamários que são bem diferenciados e adquirem expressão constitutiva e secreção de β-caseína e MIC transgênico.Embora estes estudos validem o potencial da C-myc para conduzir a tumorigénese mamária, outras observações revelaram a necessidade de eventos genéticos adicionais no desenvolvimento de carcinomas mamários derivados de MMTV-c-myc e WAP-c-myc. Por exemplo, os tumores surgiram focalmente, embora a expressão c-Myc tenha sido observada durante todo o epitélio mamário normal de ambos os ratos fêmeas MMTV-c-myc e WAP-c-myc durante a última parte da gravidez e durante todo o aleitamento. Além disso, embora a integração cromossómica aleatória de C-myc em ratos MMTV-c-myc tenha causado a expressão do transgeno em vários tecidos, A C-myc só provocou neoplasias no tecido mamário. Além disso, a latência longa de tumores e dependência da gravidez sugere que c-myc em si pode não ser suficiente para a indução de tumores mamários.
a observação de que a c-myc por si só foi insuficiente para conduzir a tumorigénese em glândulas mamárias inteiras instruiu estudos de seguimento utilizando modelos de ratinhos transgénicos duplos (ou bitransgénicos). Ratinhos transgênicos duplos Carregando tanto o C-myc quanto outro gene, como v-Ha-ras (Sinn et al., 1987), TGF-α (transforming growth factor α) (Amundadottir, Johnson, Merlino, Smith, & Dickson, 1995), bcl-2, ou neu, desenvolvem tumores mamários em frequências mais altas e com menor latência. MMTV-c-myc/MMTV-v-Ha-ras e MMTV-c-myc / MT-TGFA ratos transgênicos duplos ajudaram a elucidar que c-myc poderia sinergizar com v-Ha-ras e TGFa para diminuir a latência do tumor e eliminar a exigência de gravidez para a iniciação do tumor. Em particular, o duplo MMTV-c-myc/MT-TGFa ratinhos transgênicos não desenvolvem tecido mamário normal, e o tecido mamário de ratos de 3 semanas de idade pode formar tumores quando transplantados para ratos atímicos. Isto indica que c-myc e TGFa podem sinergizar na transformação do epitélio mamário, exigindo poucas ou nenhumas alterações genéticas adicionais (Amundadottir et al., 1995; Amundadottir, Nass, Berchem, Johnson, & Dickson, 1996).
O Chodosh laboratório desenvolveu um modelo de camundongo transgênico que permitiram o controle temporal da glândula específica de expressão do c-myc mediante o tratamento com tetraciclina derivados (Boxer, Jang, Sintasath, & Chodosh, 2004). Neste modelo, o MMTV promotor de unidades de expressão dos inversa de tetraciclina dependentes ativador transcricional, rtTA, e na presença de doxiciclina, induz a expressão de c-myc fundida a um tetraciclina dependentes promotor (MMTV-rtTA/TetO-MYC ratos transgênicos). A indução crónica de C-myc nestes ratinhos transgénicos resulta em adenocarcinomas mamários solitários após cerca de 22 semanas. Este modelo é de importância, pois permite a avaliação da dependência do tumor em relação à expressão c-myc continuada uma vez que o tumor se formou, ou “dependência do oncogene”.”Uma vez observados tumores mamários, os ratos foram retirados da Doxiciclina para avaliar se os tumores iriam regredir. Curiosamente, apenas cerca de metade dos tumores regrediram após inibição da expressão c-myc por remoção da Doxiciclina. Assim, a inactivação de C-myc não levou a uma reversão de tumores e os tumores foram capazes de crescer na ausência de sobre-expressão de C-myc. Entre os tumores que não conseguiram regredir após a inactivação de C-myc, quase todos os tumores retomaram o crescimento mesmo na ausência de expressão de C-myc. Isto sugere que a maioria dos tumores mamários primários que surgiram da ativação c-myc já adquiriu a capacidade de crescer na ausência de sobre-expressão c-myc. Entre os tumores que regrediram após a ausência de C-myc, a maioria dos tumores espontaneamente se repetiu no local inicial no prazo de 1 ano após a retirada da Doxiciclina. Tumores mamários foram encontrados para reaparecer devido à presença de células neoplásicas residuais que persistiram nas glândulas mamárias de quase todos os animais com tumores totalmente regressados. A reactivação de C-myc nas células neoplásicas residuais resultou num rápido crescimento de tumores. Adicionalmente, ciclos sucessivos de expressão c-myc resultaram na progressão de quase todos os tumores para um estado independente da Doxiciclina.