Abstrakt
Ligustrum vicaryi L. är en hybrid av Ligustrum ovalifolium Hask. var. aureo-marginatum och Ligustrum vulgale L., som tillhör familjen Oleaceae. Det används ofta som prydnadsbuske på grund av dess gyllene löv. Men dess medicinska värde är ännu inte upptäckt. Nyligen har växtpolysackarider väckt omfattande uppmärksamhet på grund av deras biologiska egenskaper, inklusive immunmodulerande och antioxidantaktiviteter. Denna studie syftade till att extrahera, rena och karakterisera polysackariden från Ligustrum vicaryi L. frukt och undersöka dess immunmodulerande och antioxidantaktiviteter. Ligustrum vicaryi L. fruktpolysackarid (LVFP) erhölls genom ultraljud extraktion, etanol utfällning, makroporös harts separation, och dialyspåse rening. De fysikalisk-kemiska egenskaperna hos LVFP belystes med användning av Fourier-transform infraröd spektrometri, högpresterande jonkromatografi och högpresterande gelfiltreringskromatografi. Resultaten indikerade att LVFP bestod av rhamnos, arabinos, galaktos och glukos i ett förhållande av 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54 och dess molekylvikt var 88 949 Da. De immunmodulerande och antioxidantaktiviteterna hos LVFP undersöktes med användning av en cyklofosfamid- (Cy -) – inducerad immunsupprimerad musmodell. Resultaten visade att LVFP signifikant ökade mjälte-och tymusindex, förbättrade den fagocytiska funktionen hos neutrofiler, aktiverade B-och T-lymfocyter och uppreglerade serumnivåer av IL-10 och TNF-XXL. Dessutom observerade vi att lvfp lindrade Cy-inducerad leverskada genom att öka superoxiddismutas (SOD) och glutationperoxidas (GSH-px) nivåer. Dessa resultat antydde att LVFP har immunmodulerande och antioxidantaktiviteter och lägger därför en grund för tillämpningen av LVFP i läkemedels-och funktionella livsmedelsindustrin.
1. Introduktion
immunmodulatorer kan användas som förebyggande eller terapeutiska strategier, vilket ökar eller undertrycker värdförsvarssvaret. Naturliga produkter med immunmodulerande och antioxidantfunktioner används ofta för att behandla flera sjukdomar, inklusive autoimmun sjukdom, inflammatorisk sjukdom och cancer . Nyligen har det ökat intresse för billiga och mindre giftiga naturprodukter över användningen av syntetiska kemoterapeutiska medel.
Ligustrum vicaryi L. är en hybrid av Ligustrum ovalifolium Hask. var. aureo-marginatum och Ligustrum vulgale L., som tillhör familjen Oleaceae . Den presenterar en klorofyllfri fenotyp och används ofta som en trädgårdsbuske på grund av dess gyllene löv. Enligt gasutbytesegenskaperna och klorofyllfluorescensresponserna kan Ligustrum vicaryi L. motstå SO2 och kan således användas för fytostabilisering av Cd-förorenad jord . Även om Ligustrum vicaryi L. har högt Prydnads-och miljöskyddsvärde, är dess terapeutiska potential ännu inte klarlagd.
Växtpolysackarider, en klass av viktiga biologiska makromolekyler som vanligtvis finns i traditionella medicinska örter, uppvisar en rad biologiska aktiviteter inklusive antioxidant, immunmodulerande, antiaging, antitumör och antiinflammatoriska aktiviteter . Under de senaste åren har det gjorts många studier som ägnas åt extraktions-och bioaktivitetsanalys av växtpolysackarider. Växtfruktpolysackarider är de vanligaste undersökta, inklusive jujube polysackarider , persimmonpolysackarider och vattenmelonpolysackarider . Så vitt vi vet har en studie baserad på beredning och bioaktivitet av Ligustrum vicaryi L. fruktpolysackarider (LVFPs) inte rapporterats.
i denna studie extraherades och renades LVFP. Därefter analyserades molekylvikten och monosackaridkompositionen av LVFP. Dessutom bedömdes de biologiska funktionerna hos LVFP i en cyklofosfamid – (Cy -) inducerad immunsupprimerad musmodell. Resultaten visade att LVFP har immunmodulerande förmåga genom att aktivera både medfödd och adaptiv immunitet. Dessutom visade LVFP antioxidantaktivitet genom att öka superoxiddismutas (SOD) och glutationperoxidas (GSH-px). Denna studie presenterade en teoretisk grund för att utveckla LVFP som ett alternativt terapeutiskt botemedel mot immunrelaterade sjukdomar.
2. Material och metoder
2.1. Djurskydd och etiska uttalanden
alla experimentella förfaranden följde rekommendationerna från ARRIVE (animal research: reporting in vivo experiments) riktlinjer . Institutional Animal Care and Use Committee of Jining Medical University godkände förfarandena. Alla experimentella förfaranden genomfördes så mänskligt som möjligt. Totalt 100 friska manliga Kunming-möss som väger 20-25 g hölls vid förhållanden som upprätthöll 12 timmar av en mörk ljus konstgjord cykel, med mat och vatten tillgängligt Ad libitum. Djuren var inrymda i vanliga djurrum, med en temperatur på 20-22 kcal C och fuktighet vid 55-60%.
2.2. Extraktion och rening av polysackarid
Ligustrum vicaryi L. frukt erhölls från Botaniska trädgården i Jining Medical University (Rizhao, Shandong, Kina) och identifierades av Jianan Wang (Medicinsk botaniker, School of Pharmacy, Jining Medical University). Torkad Ligustrum vicaryi L. frukt pulveriserades och siktades genom en 40-mesh sikt. Pulvret nedsänktes i aceton (förhållandet mellan pulver och aceton var 1 : 3) och skakades i 24 timmar för att avlägsna lipider. Supernatanten kastades bort och resterna torkades i ugnen. Polysackariden extraherades med destillerat vatten 8 : 1 (v/w) vid 50 kcal C för 80 min med användning av en ultraljudseffekt på 250 W. Vattenextraktet filtrerades med bomull. Återstoden avlägsnades efter centrifugering vid 3000 rpm under 3 min. Därefter utfälldes den koncentrerade supernatanten med 70% etanol, och denna process upprepades med 95% etanol. Efter att supernatanten avlägsnades tillsattes destillerat vatten för att lösa upp extraktet och återstoden avlägsnades genom centrifugering. Dm101 makroporöst harts användes för att avlägsna pigmentet. Sevage-reagenset (kloroform / 1-butanol, v / V = 4 : 1) användes för att avlägsna proteinet tills ingen missfärgningsreaktion observerades med Coomassie Brilliant Blue g-250 detektion. Polysackariderna placerades i en frystork i 24 timmar för att erhålla det frysta pulvret. De små molekylerna i polysackariden avlägsnades genom användning av en dialyspåse (molekylär cutoff av 3500 Da) i två dagar och destillerat vatten ersattes var 12: e timme. kolonnkromatografi Sephadex G-200 användes för att rena LVFP. Antron-svavelsyraanalysen, med en glukosstandardkurva, användes för att bestämma renheten hos LVFP.
2.3. Fourier-Transform infraröd (FTIR) analys
LVFP blandades med rent kaliumbromidpulver och blandningen placerades i en agatmortel och maldes jämnt under en infraröd lampa. Blandningen bedömdes med användning av Fourier-transform infraröd spektrometer IRTracer-100 (Shimadzu, Japan).
2.4. Högpresterande Jonkromatografi (HPIC)
för HPIC-analys löstes 5 mg LVFP i 1 mL 2 mol/L trifluorättiksyra och placerades vid 121 kcal C för 2 timmar för hydrolys. Därefter filtrerades blandningen med användning av ett mikroporöst filtreringsmembran på 0,45 kcal. Den kromatografiska separationen av monosackarider utfördes på ICS-5000-jonkromatografen utrustad med en carbopac PA20-kolonn och pulsamperedetektor. Jonkromatografiseparationsförhållandena justerades och testades för en blandning av åtta monosackaridstandarder (fukos, rhamnos, arabinos, galaktos, glukos, xylos, mannos och fruktos). En överlägsen separation erhölls genom gradient eluering med en konstant flödeshastighet av 0,5 mL/min. Den mobila fasen bestod av 250 mM NaOH (A), vatten (innehållande 1 M NaAc%, v/v, B) och vatten (C). Elueringen utfördes enligt följande: 2.0% a vid 0 21 min; 2,0% a och 5,0% B vid 21,1 min; 2,0% A och 20% B vid 21,1 30 min; och 80% A vid 30,1 50 min.
2.5. Högpresterande Gelfiltreringskromatografi (HPGFC)
polysackaridmolekylmassan analyserades av HPGFC (Waters, New York, USA) och utrustad med RID (2414 brytningsindexdetektor) och Empower 3 arbetsstation. De kromatografiska betingelserna var följande: kromatografisk kolonn: Ultrahydrogel 2, 300 mm 7,8 mm 2, 7,8 mm 2, mobil fas: 0,1 M NaNO3, flödeshastighet: 0,9 mL / min och kolonntemperatur: 45 C. Provet löstes i vätskefasen och filtrerades av ett mikroporöst filtreringsmembran. Molekylviktsstandarder som användes för kalibreringskurvan var MW135350, MW36800, MW9750, MW2700 och MW180.
2.6. Cyklofosfamid – (Cy -) inducerad immunsuppressiv musmodell och Lvfp-administrering
totalt 100 möss delades slumpmässigt in i fem grupper: kontroll, Cy, Cy + LVFP (100 mg/kg/dag), Cy + LVFP (200 mg/kg/dag) och Cy + LVFP (400 mg/kg/dag). Kontrollgruppen administrerades normal saltlösning och de andra fyra grupperna injicerades intraperitonealt med Cy (40 mg/kg) varje dag i sju dagar. LVFP administrerades genom intragastrisk administrering i sju på varandra följande dagar.
2.7. Bestämning av mjälte-och Tymusindex
alla möss vägdes och offrades 24 timmar efter den sista läkemedelsadministrationen. Mjälten och tymus skars ut och vägdes. Mjälten eller tymus-indexet uttrycktes som förhållandet mellan mjälten eller tymus vikt och kroppsvikt.
2.8. Bestämning av fagocytisk funktion hos Musneutrofiler
Staphylococcus aureus användes för att bedöma fagocytos hos neutrofiler. I korthet erhölls 40 ml blod från möss efter administrering av LVFP och placerades i ett heparinrör för att förhindra koagulering. Därefter tillsattes 40 occyl bakteriell suspension till ovannämnda rör. Blandningen belades jämnt på glasskivor och hölls vid rumstemperatur i 0,5 h. därefter fixerades blandningen med 2-3 droppar metanol i 5 minuter och färgades med 4-5 droppar Wrights fläck i 5 minuter. Totalt 100 neutrofiler observerades och registrerades. Den neutrofila fagocytiska hastigheten och det neutrofila fagocytiska indexet beräknades enligt följande: den neutrofila fagocytiska hastigheten = antalet neutrofiler som uppvisade fagocytisk funktion/det totala antalet neutrofiler och det neutrofila fagocytiska indexet = det totala antalet bakterier som hade uppslukats av neutrofiler/det totala antalet neutrofiler.
2.9. Bestämning av Serumhemolysin med ELISA
på den fjärde dagen injicerades 5% av en kycklingröd blodcell (CRBC) suspension intraperitonealt i mössen (0, 1 mL/10 g). På den sjunde dagen, 2 h efter lvfp-administrering, erhölls 1 mL mössblod och centrifugerades i 10 minuter. Sedan tillsattes 40 oc serum till 2 mL normal saltlösning. En mL 10% marsvinserum och 1 mL 5% CRBC-suspension tillsattes till serumet, följt av inkubation i ett vattenbad vid 37 kcal C under 0,5 h. blandningen centrifugerades och supernatanten placerades i en 96-brunns odlingsplatta. Motsvarande optiska densitetsvärde detekterades av Thermo Scientific Multiskan MK3 Enzyme Mark-instrumentet (Waltham, MA, USA).
2.10. Bestämning av T-Lymfocyttransformationshastighet
på andra dagen injicerades mössen intramuskulärt 8 mg / kg fytohemagglutinin (PHA). På den sjunde dagen, 2 h efter lvfp-administrering, samlades 40 tkkl blod från retroorbital sinus, placerades på en glid och färgades med 4-5 droppar Wrights fläck. Överskottet färgämne sköljdes med vatten efter 20 min. Med hjälp av ett mikroskop observerades 100 celler. De transformerade lymfocyterna beräknades enligt följande: lymfocyttransformationshastighet = transformerade lymfocyter/totalt antal lymfocyter.
2.11. Fördröjd överkänslighet (DTH) svar
DTH svar undersöktes av graden av öronsvullnad. I allmänhet tros graden av öronsvullnad återspegla graden av inflammation . DTH-svaret mättes enligt följande: på den andra dagen avlägsnades 1 cm2 bukhår med användning av Na2S och bukhuden täcktes med 25 oC 1-fluoro-2,4-dinitrobensen (DNFB) lösning. På den sjätte dagen belades huden på höger öra med 20 ml dnfb-lösning. På den sjunde dagen, 2 h efter lvfp-administreringen, offrades mössen och de två öronen skars ut och vägdes. Viktskillnaden mellan de två öronen bestämde graden av öronsvullnad.
2.12. Detektion av TNF-II och IL-10 cytokiner i Serum
på den sjunde dagen, 2 timmar efter administrering av lvfp, erhölls mössblodet med användning av en retroorbital sinuspunktur och koagulerades naturligt i 15 minuter vid rumstemperatur. Därefter centrifugerades blodet i 20 minuter och supernatanten uppsamlades. TNF-dB och IL-10 i supernatanten detekterades med hjälp av ELISA-Kit (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina).
2.13. Detektion av superoxiddismutas( SOD), glutationperoxidas (GSH-Px) och metan dikarboxylsyra aldehyd (MDA) nivåer
på den åttonde dagen offrades mössen och levern extraherades. Efter slipning och centrifugering uppsamlades supernatanten av levervävnad för detektering av SOD, GSH-px och MDA. SOD, GSH-px och MDA mättes med ELISA-Kit (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina).
2.14. Hematoxylin och eosin (HE) färgning
he färgning utfördes som tidigare rapporterats . På den åttonde dagen offrades mössen och levervävnader extraherades och fixerades i 10% neutralt buffrat formalin. Efter inbäddning i paraffin skars vävnaderna i 5 sek. m. sektioner. Sedan färgades glidbanorna med HE för att bestämma morfologiska förändringar. Bilderna fotograferades under ett ljusmikroskop (Olympus, Tokyo, Japan).
2.15. Statistisk analys
försökspersoner / preparat tilldelades slumpmässigt till grupper och lika gruppstorlekar erhölls. Gruppuppgifter, datainspelning och dataanalys avslöjades inte för utredaren. Data visas som medelvärdet för SD från minst fem oberoende experiment. Envägs ANOVA åtföljd av Tukeys test för flera jämförelser användes för flera jämförelser med GraphPad Prism version 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) och ansågs statistiskt signifikant.
3. Resultat
3.1. FTIR-spektrumanalys av LVFP
Lvfp extraherades genom lipidavlägsnande via aceton, varmt vatten kombinerat med ultraljudsextraktion, etanolutfällning, pigmentavlägsnande med makroporöst harts, deproteinering med Sevage-reagenset respektive avlägsnande av små molekyler med en dialyspåse. Dessutom kännetecknades den nya polysackaridstrukturen av infraröd spektroskopi. FTIR-spektrumanalysen av LVFP visas i Figur 1(a). Den karakteristiska breda toppen vid 3345 cm−1 motsvarade O-H (kanske inklusive N-H) sträckande vibrationer. Absorptionstoppen vid 2929 cm−1 motsvarade C-H-sträckningsvibrationsabsorptionstoppen och sockerabsorptionstoppen. Absorptionen vid 1599 cm−1 indikerade böjningsvibrationslägen för-OH. Toppen vid 1412 cm−1 berodde på närvaron av C-H-böjningsvibrationer. Vidare indikerade absorptionerna vid 1073 cm−1 böjningsvibrationslägena för C-O-sträckning i den alkoholiska hydroxylgruppformen.
3.2. Monosackaridkomposition av LVFP
monosackaridkompositionerna av LVFP analyserades med HPIC. Som visas i figurerna 1(b) och 1(c) identifierades alla monosackarider som fanns i polysackarider enligt elueringstiden för monosackaridstandarderna, med hänvisning till en standardkurva. LVFP bestod huvudsakligen av rhamnos, arabinos, galaktos och glukos i molförhållandet 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.
3.3. Bestämning av molekylvikten för LVFP med HPGFC
molekylvikten för LVFP detekterades av HPGFC. Dextrans (molekylvikt: 180, 2700, 9750, 368000 och 135350 Da) användes som standarder eftersom de är vattenlösliga och tillgängliga i ett brett spektrum av molekylmassor. Standarderna gav riktlinjer för att uppskatta storleken på LVFP. En standardkurva erhölls (y = -0,523 x + 13,01, R2 = 0,995). Resultaten visade att molekylvikten för LVFP var 88,949 Da.
3.4. Effekter av LVFP på tymus och Mjälteindex i Cy-inducerade immunsuppressiva möss
den Cy-inducerade immunsuppressiva musmodellen fastställdes för att undersöka lvfp: s immunmodulerande aktivitet. Cy administrerades som en intraperitoneal injektion (40 mg/kg) varje dag i sju dagar. Efter fem dagars cy-administrering uppvisade mössen symtom som håravfall, låg spänning, aggression, dålig aptit och viktminskning, medan ingen uppenbar förändring observerades i kontrollgruppen, vilket indikerar att djurmodellen framgångsrikt etablerades. Cy + LVFP-grupper administrerades olika koncentrationer av LVFP (100, 200 och 400 mg/kg/dag) under sju på varandra följande dagar. Mjälte – och tymusindex återspeglar organismens immunfunktioner . Lvfp-effekterna på tymus-och mjältindexen i de Cy-inducerade immunsuppressiva mössen visas i Figur 2. Jämfört med kontrollgruppen visade Cy-gruppen en signifikant minskning av tymus-och mjältindex. Lvfp-administrering ökade signifikant dessa index på ett dosberoende sätt. Dessa resultat antydde att LVFP kunde påverka immunorganen för att förbättra immuniteten.
(a)
(b)
(a)
(b)
3.5. Effekter av LVFP på neutrofil fagocytos hos Cy-inducerade immunsuppressiva möss
neutrofiler är ett effektivt försvar mot invaderande mikroorganismer . Fagocytos är en nyckelstrategi för neutrofiler vid dödande patogener . Fagocytisk hastighet och fagocytisk index undersöktes för att undersöka aktiveringen av neutrofiler . Som visas i Figur 3, jämfört med kontrollgruppen, hade Cy-gruppen signifikant reducerad fagocytisk hastighet och fagocytiskt index, vilket tyder på en immunsuppressiv status. Administrering av LVFP (200 mg/kg och 400 mg/kg) lindrade dessa förändringar avsevärt. Dessa resultat antydde att LVFP kan förbättra den fagocytiska funktionen hos neutrofiler.
(a)
(b)
(a)
(b)
3.6. Effekter av LVFP på Humoral immunitet och cellulär immunitet hos Cy-inducerade immunsuppressiva möss
Humoral immunitet är avgörande för kroppen att bekämpa tumörer och infektioner. Serumhemolysinnivån kan användas för att utvärdera det humorala immunsvaret . Serumhemolysinet minskades genom Cy-behandling, och denna förändring dämpades signifikant av LVFP på ett dosberoende sätt (Figur 4(A)). En mängd antigener från blod kan aktivera T-lymfocyter. PHA kan fungera som en mitogen för att utlösa aktivering och proliferation av T-celler . T-lymfocyttransformationsanalysen utfördes med användning av musblod efter PHA-stimulering i närvaro eller frånvaro av LVFP. Som visas i Figur 4(b) hämmade alla tre doserna av LVFP markant den Cy-inducerade reduktionen av T-lymfocyttransformationshastigheten. DTH-svaret är ett t-cellmedierat immunsvar . DTH-svaret bedömdes genom att mäta graden av öronsvullnad. Alla tre doserna av LVFP dämpade markant Cy-inducerad hämning i öronsvullnadsgraden(Figur 4 (c)). Dessa resultat antydde att LVFP kan aktivera B-och T-lymfocyter.
(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
3.7. Effekter av LVFP på uttrycket av IL-10 och TNF-Macau i Serum av Cy-inducerade immunsuppressiva möss
cytokiner utsöndrade av immunceller spelar viktiga roller i värdförsvar . IL – 10 och TNF-XXL är viktiga inflammatoriska mediatorer . ELISA utfördes för att fastställa effekterna av LVFP på serumuttrycket av IL-10 och TNF-XXL. Våra resultat visade att uttrycken IL-10 och TNF-Bisexuell, efter Cy-behandling, minskade signifikant. Lvfp-administrering dosberoende ökade IL – 10-och TNF-bronkialnivåerna (Figur 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
3.8. Effekter av LVFP på oxidativ Stress hos Cy-inducerade immunsuppressiva möss
vidare undersökte denna studie om LVFP lindrade Cy-inducerad oxidativ stress och leverskada. SOD omvandlar superoxidanjonen till H2O2 och O2 för att förhindra och neutralisera den fria radikala inducerade skadan . GSH-px antas vara ett viktigt endogent försvar mot peroxidativ förstörelse av cellmembranet . MDA är slutprodukten av lipidperoxidation och kan återspegla oxidativ skada i levervävnaden . Figurerna 6 (a) -6(c) visar de signifikant minskade SOD-och GSH-px-uttrycken, med ökade mda-nivåer i levervävnaden efter Cy-behandling. Administrering av lvfp dosberoende ökade SOD-och GSH-px-nivåerna och minskade mda-nivån. Därefter bedömdes förändringarna i levermorfologi med HE-färgning. Som visas i Figur 6 (d), i Cy-gruppen var levercellerna glesa och störda med den pyknotiska kärnan. De hepatiska sinusoiderna var fulla av röda blodkroppar. Som förväntat arrangerades levercellerna i lvfp-gruppen på ett ordnat sätt med en klar nukleolus, jämförbar med dem i kontrollgruppen. Resultaten indikerade att LVFP kunde dämpa oxidativ stress och leverskada inducerad av Cy.
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
4. Diskussion
i denna studie extraherades en polysackarid från Ligustrum vicaryi L.-frukten och dess immunmodulerande och antioxidantaktiviteter bedömdes. Polysackariden extraherades med varmt vatten i kombination med ultraljudsextraktion, etanolutfällning, fettavlägsnande med aceton, pigmentavlägsnande med dm101 makroporöst harts, deproteinering med Sevage-reagenset (kloroform/1-butanol, v/V = 4 : 1) respektive avlägsnande av små molekyler med dialyspåsen. Dessutom kännetecknades denna polysackaridstruktur av infraröd spektroskopi, HPGFC-RID och HPIC. Resultaten indikerade att molekylvikten för LVFP är 88 949 Da, och LVFP består av fyra monosackarider, nämligen rhamnos, arabinos, galaktos och glukos i molförhållandet 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.
immunsuppression är ett tillstånd av tillfällig eller permanent immun dysfunktion och kan göra en organism mer känslig för patogener. Utveckling av nya immunmodulerande medel är en av de mest effektiva metoderna för förebyggande och behandling av immunsuppressiva sjukdomar . Till exempel verkar immunmodulerande medel i kombination med kemoterapi läkemedel vara användbara vid cancerterapi . Flera rapporter har visat positiva korrelationer mellan immunmodulerande åtgärder och polysackarider. Ayeka et al. visat att lakrits (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) polysackarid har immunmodulerande effekter uppenbara genom aktivering av CD4 + och CD8+ immuncellpopulationer och ökad produktion av olika cytokiner, såsom IL-2, IL-6 och IL-7 . Chen et al. isolerade polysackarider från Schisandra sphenanthera och Schisandra chinensis; dessa extrakt kan förbättra den fagocytiska aktiviteten hos makrofager och förbättra kroppens immunitet . Enligt uppgift observerades att polysackariderna från Schisandra sphenanthera och Schisandra chinensis huvudsakligen bestod av arabinos, glukos och galaktos, liknande sammansättningen av LVFP. För att undersöka om LVFP hade immunmodulerande funktioner etablerades en Cy-inducerad immunsupprimerad musmodell. Cy är ett kemoterapeutiskt medel och har använts för att etablera immunsuppressiva djurmodeller . På nivån av immunorgan indikerade resultaten att LVFP signifikant ökade mjälte-och tymusindex i Cy-inducerade immunsuppressiva möss. På nivån av immunceller observerades att LVFP förbättrade den fagocytiska funktionen hos neutrofiler och främjade B-och T-lymfocytaktivering. Dessa data indikerar att LVFP kan förbättra både medfödd och adaptiv immunitet.
dessutom undersöktes också immunrelaterade cytokiner i serum, och resultaten indikerade att LVFP ökade IL-10 och TNF-askorbinhalterna. Enligt uppgift kan flera typer av polysackarider påverka uttrycket av inflammatoriska faktorer. Chen et al. observerade att sulfaterade polysackarider från filamentösa mikroalger Tribonema sp. kan förbättra IL-6 -, IL-10-och TNF-Kazaki-uttryck i makrofager . Cheng et al. rapporterade att polysackarider från den vilda Lactarius deliciosus ökade sekretionen av TNF-6, IL-1, och IL-6 i makrofager . Wang et al. rapporterade att polysackariden från laven Umbilicaria esculenta inducerade frisättningen av TNF-XXL, IFN-XXL, IL-1 XL, IL-6 och IL-10 i murina makrofager .
antioxidanter är ämnen som undertrycker oxidation i människokroppen. Vanligtvis finns det en balans mellan produktion av reaktiva syrearter och antioxidantförsvarssystem, vilket är oumbärligt vid normal metabolism. Celler producerar vissa endogena antioxidanter som SOD och GSH-px för att undertrycka överdrivna fria radikaler . Denna studie bestämde antioxidantaktiviteten hos LVFP i Cy-inducerade immunsuppressiva möss. Resultaten visade att LVFP uppvisade en signifikant ökning av SOD-och GSH-px-uttryck. Dessutom minskade LVFP mda-uttryck, vilket indikerar oxidativ skada i levern. Han färgning indikerade att LVFP kan lindra levercellskador inducerad av Cy. Således kan man dra slutsatsen att LVFP kan skydda celler från oxidativ stressinducerad skada genom att öka produktionen av antioxidanter såsom SOD och GSH-px. Tidigare forskning har visat att innehållet av rhamnos, arabinos och galaktos i monosackaridkompositionen kan påverka antioxidantaktiviteten . Innehållet av rhamnos, arabinos och galaktos i LVFP är högre, vilket kan vara viktigt för den starkare antioxidantaktiviteten som demonstreras av LVFP.
sammantaget extraherades polysackarider från Ligustrum vicaryi L. frukt och deras fysiska och biologiska egenskaper undersöktes. LVFP kan undersökas som ett potentiellt immunmodulerande och antioxidantmedel för terapeutisk användning vid immunsuppressiva sjukdomar, vilket möjliggör införandet av traditionell kinesisk medicin på den internationella marknaden.
5. Slutsatser
Sammanfattningsvis extraherades och renades lvfp från Ligustrum vicaryi L. frukt med en molekylvikt av 88,949 Da och bestod av fyra monosackarider, nämligen rhamnos, arabinos, galaktos och glukos. Preliminära farmakologiska studier visade att LVFP effektivt kunde förbättra immunfunktionerna och hade antioxidantaktivitet. Denna studie visar att LVFP kan vara ett lovande immunmodulerande och antioxidantmedel för farmaceutiska terapier (Figur 7).
datatillgänglighet
TIF-data som används för att stödja resultaten av denna studie är tillgängliga från motsvarande författare på begäran.
intressekonflikter
författarna förklarar att det inte finns några intressekonflikter angående publiceringen av detta dokument.
bekräftelser
detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation of China (81800399), Jining Medical University Doctoral Research Startup Fund, Fonden för Högskolestudenters innovations-och Entreprenörskapsutbildningsprojekt på nationell nivå (201610443011), Shandong Traditional Chinese Medicine Science and Technology Development Program (2019-0450) och Jining Medical University Student Innovation Training Program (cx2016011/cx2019092).