Resumen
Ligustrum vicaryi L. es un híbrido de Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum y Ligustrum vulgale L., pertenecientes a la familia Oleaceae. A menudo se usa como arbusto ornamental debido a sus hojas doradas. Sin embargo, su valor médico aún está por descubrir. Recientemente, los polisacáridos de plantas han atraído una atención integral debido a sus propiedades biológicas, incluidas las actividades inmunomoduladoras y antioxidantes. Este estudio tuvo como objetivo extraer, purificar y caracterizar el polisacárido de la fruta Ligustrum vicaryi L. e investigar sus actividades inmunomoduladoras y antioxidantes. El polisacárido de fruta de Ligustrum vicaryi L. (LVFP) se obtuvo por extracción ultrasónica, precipitación de etanol, separación de resina macroporosa y purificación de bolsas de diálisis. Las propiedades fisicoquímicas del PFVI se dilucidaron mediante espectrometría infrarroja por transformada de Fourier, cromatografía iónica de alto rendimiento y cromatografía de filtración de gel de alto rendimiento. Los resultados indicaron que el PFVI consistía en ramnosa, arabinosa, galactosa y glucosa en una proporción de 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54, y su peso molecular era de 88.949 Da. Las actividades inmunomoduladoras y antioxidantes del PFVI se investigaron utilizando un modelo de ratón inmunosuprimido inducido por ciclofosfamida (Cy). Los resultados demostraron que la PFVI aumentaba significativamente los índices de bazo y timo, aumentaba la función fagocítica de los neutrófilos, los linfocitos B y T activados y aumentaba los niveles séricos de IL-10 y TNF-α. Además, observamos que la PFVI aliviaba el daño hepático inducido por Cy al aumentar los niveles de superóxido dismutasa (SOD) y glutatión peroxidasa (GSH-px). Estos resultados sugirieron que el PFVI tiene las actividades inmunomoduladoras y antioxidantes, por lo que sienta las bases para la aplicación del PFVI en las industrias farmacéutica y alimentaria funcional.
1. Introducción
Los inmunomoduladores pueden utilizarse como estrategias preventivas o terapéuticas, potenciando o suprimiendo la respuesta de defensa del huésped. Los productos naturales con funciones inmunomoduladoras y antioxidantes se utilizan ampliamente para tratar varias enfermedades, incluidas las enfermedades autoinmunes, los trastornos inflamatorios y el cáncer . Recientemente, ha habido un creciente interés en productos naturales baratos y menos tóxicos sobre el uso de agentes quimioterapéuticos sintéticos.
Ligustrum vicaryi L. es un híbrido de Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum y Ligustrum vulgale L., pertenecientes a la familia Oleaceae . Presenta un fenotipo sin clorofila y es ampliamente utilizado como arbusto hortícola debido a sus hojas doradas. De acuerdo con las características de intercambio de gases y las respuestas de fluorescencia de la clorofila, el Ligustrum vicaryi L. puede resistir el SO2 y, por lo tanto, puede usarse para la fitoestabilización de suelos contaminados con Cd . Aunque Ligustrum vicaryi L. tiene un alto valor ornamental y de protección del medio ambiente, su potencial terapéutico aún no se ha dilucidado.
Los polisacáridos de plantas, una clase de macromoléculas biológicas importantes que se encuentran comúnmente en las hierbas medicinales tradicionales, exhiben una gama de actividades biológicas que incluyen actividades antioxidantes, inmunomoduladoras, antienvejecimiento, antitumorales y antiinflamatorias . En los últimos años, se han realizado muchos estudios dedicados a la extracción y análisis de bioactividad de polisacáridos de plantas. Los polisacáridos de frutas de plantas son los más investigados, incluidos los polisacáridos de azufaifa , los polisacáridos de caqui y los polisacáridos de sandía . Hasta donde sabemos, no se ha notificado un estudio basado en la preparación y las bioactividades de los polisacáridos de frutas de Ligustrum vicaryi L. (LVFPs).
En este estudio, la LVFP fue extraída y purificada. A continuación, se analizó el peso molecular y la composición de monosacáridos de la PFVI. Además, se evaluaron las funciones biológicas de la PFVI en un modelo de ratón inmunosuprimido inducido por ciclofosfamida (Cy). Los resultados demostraron que la PFVI tiene capacidad inmunomoduladora al activar la inmunidad innata y adaptativa. Además, el PFVI demostró actividad antioxidante al aumentar la superóxido dismutasa (SOD) y la glutatión peroxidasa (GSH-px). Este estudio presentó una base teórica para el desarrollo de la PFVI como un remedio terapéutico alternativo para enfermedades relacionadas con el sistema inmunitario.
2. Materiales y Métodos
2.1. Bienestar Animal y Declaraciones éticas
Todos los procedimientos experimentales cumplieron con las recomendaciones de las directrices ARRIVE (investigación con animales: informes de experimentos in vivo). El Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Médica de Jining aprobó los procedimientos. Todos los procedimientos experimentales se llevaron a cabo de la manera más humana posible. Un total de 100 ratones Kunming machos sanos de entre 20 y 25 g se alojaron en condiciones que mantenían 12 h de ciclo artificial de luz oscura, con alimentos y agua disponibles ad libitum. Los animales fueron alojados en habitaciones estándar, con una temperatura de 20-22°C y una humedad del 55-60%.
2.2. Extracción y purificación de Polisacáridos
Ligustrum vicaryi L. las frutas se obtuvieron del jardín botánico de la Universidad Médica de Jining (Rizhao, Shandong, China) e identificadas por Jianan Wang (Botánico Médico, Facultad de Farmacia, Universidad Médica de Jining). Los frutos secos de Ligustrum vicaryi L. fueron pulverizados y tamizados a través de un tamiz de 40 mallas. El polvo se sumergió en acetona (la proporción de polvo a acetona fue de 1 : 3) y se agitó durante 24 h para eliminar los lípidos. El sobrenadante se desechó y los restos se secaron en el horno. El polisacárido se extrajo con agua destilada 8: 1 (v/w) a 50°C durante 80 min utilizando una potencia ultrasónica de 250 W. El extracto de agua se filtró con algodón. El residuo se eliminó después de la centrifugación a 3000 rpm durante 3 min. A continuación, el sobrenadante concentrado se precipitó con etanol al 70%, y este proceso se repitió con etanol al 95%. Después de retirar el sobrenadante, se añadió agua destilada para disolver el extracto y el residuo se eliminó por centrifugación. Se utilizó la resina macroporosa DM101 para eliminar el pigmento. El reactivo de separación (cloroformo / 1-butanol, v/v = 4 : 1) se utilizó para eliminar la proteína hasta que no se observó ninguna reacción de decoloración utilizando la detección de Azul brillante G-250 de Coomassie. Los polisacáridos se colocaron en un secador de congelación durante 24 h para obtener el polvo congelado. Las moléculas pequeñas en el polisacárido se eliminaron utilizando una bolsa de diálisis (corte molecular de 3500 Da) durante dos días, y el agua destilada se reemplazó cada 12 h.Se utilizó cromatografía en columna Sephadex G-200 para purificar el PFVI. El anthrone-ácido sulfúrico de ensayo, con una curva estándar de glucosa, se utilizó para determinar la pureza de la LVFP.
2.3. Análisis infrarrojo por transformada de Fourier (FTIR)
El LVFP se mezcló con polvo de bromuro de potasio puro, y la mezcla se colocó en un mortero de ágata y se molió uniformemente bajo una lámpara de infrarrojos. La mezcla se evaluó utilizando el espectrómetro infrarrojo por transformada de Fourier IRTracer – 100 (Shimadzu, Japón).
2.4. Cromatografía Iónica de alto rendimiento (HPIC)
Para el análisis de HPIC, se disolvieron 5 mg de PFVI en 1 ml de ácido trifluoroacético de 2 mol/L y se colocaron a 121°C durante 2 h para hidrólisis. Luego, la mezcla se filtró utilizando una membrana de filtración microporosa de 0,45 µm. La separación cromatográfica de monosacáridos se realizó en el cromatógrafo iónico ICS-5000 equipado con un detector de amperios de pulso y columna CarboPac PA20. Las condiciones de separación de la cromatografía iónica se ajustaron y probaron para una mezcla de ocho patrones de monosacáridos (fucosa, ramnosa, arabinosa, galactosa, glucosa, xilosa, manosa y fructosa). Se obtuvo una separación superior por elución de gradiente con un caudal constante de 0,5 ml / min. La fase móvil consistió en NaOH (A) de 250 mm, agua (conteniendo 1 M de NaAc%, v/v, B) y agua (C). La elución se llevó a cabo de la siguiente manera: 2.0% A a 0 2 21 min; 2,0% A y 5,0% B a 21,1 min; 2,0% A y 20% B a 21,1 3 30 min; y 80% A a 30,1 5 50 min.
2.5. Cromatografía de filtración de Gel de alto rendimiento (HPGFC)
La masa molecular de los polisacáridos fue analizada por HPGFC (Waters, Nueva York, EE.UU.) y equipada con el detector de índice de refracción RID (2414) y la estación de trabajo Empower 3. Las condiciones cromatográficas fueron las siguientes: columna cromatográfica: Ultrahidrogel™ Lineal, 300 mm × 7,8 mm × 2, fase móvil: 0,1 M NaNO3, caudal: 0,9 mL/min y temperatura de la columna: 45°C. La muestra se disolvió en fase líquida y se filtró por una membrana de filtración microporosa. Los estándares de peso molecular utilizados para la curva de calibración fueron MW135350, MW36800, MW9750, MW2700 y MW180.
2.6. Ciclofosfamida (Cy) Inducida por la Inmunosupresores Modelo de Ratón y LVFP Administración
Un total de 100 ratones fueron divididos aleatoriamente en cinco grupos: control, Cy, Cy + LVFP (100 mg/kg/día), Cy + LVFP (200 mg/kg/día), y Cy + LVFP (400 mg/kg/día). Al grupo control se le administró solución salina normal, y a los otros cuatro grupos se les inyectó por vía intraperitoneal Cy (40 mg/kg) todos los días durante siete días. La LVFP fue administrado por la administración intragástrica durante siete días consecutivos.
2.7. Determinación de los Índices de Bazo y Timo
Todos los ratones fueron pesados y sacrificados 24 h después de la última administración del fármaco. El bazo y el timo fueron extirpados y pesados. El índice del bazo o del timo se expresó como la relación entre el peso del bazo o del timo y el peso corporal.
2.8. Para evaluar la fagocitosis de neutrófilos se utilizó la determinación de la Función Fagocítica de neutrófilos de Ratón
Staphylococcus aureus. En resumen, se obtuvieron 40 µL de sangre de ratones después de la administración de PFVI y se colocaron en un tubo de heparina para evitar la coagulación. A continuación, se agregaron 40 µL de suspensión bacteriana al tubo mencionado anteriormente. La mezcla se cubrió uniformemente en portaobjetos de vidrio y se mantuvo a temperatura ambiente durante 0,5 h. Luego, la mezcla se fijó con 2-3 gotas de metanol durante 5 minutos y se teñió con 4-5 gotas de tinción de Wright durante 5 minutos. Se observaron y registraron un total de 100 neutrófilos. La tasa fagocítica de neutrófilos y el índice fagocítico de neutrófilos se calcularon de la siguiente manera: la tasa fagocítica de neutrófilos = el número de neutrófilos que presentaban función fagocítica/el número total de neutrófilos y el índice fagocítico de neutrófilos = el número total de bacterias que habían sido absorbidas por neutrófilos/el número total de neutrófilos.
2.9. Determinación de Hemolisina sérica mediante ELISA
En el cuarto día, se inyectó intraperitonealmente en ratones el 5% de una suspensión de glóbulos rojos de pollo (CRBC) (0,1 ml/10 g). Al séptimo día, 2 h después de la administración de la PFVI, se obtuvo 1 mL de sangre de ratón y se centrifugó durante 10 min. A continuación, se añadieron 40 µL de suero a 2 ml de solución salina normal. Un ml de suero de cobaya al 10% y 1 ml de suspensión de glóbulos rojos al 5% se añadieron al suero, seguido de incubación en un baño de agua a 37°C durante 0,5 h. La mezcla se centrifugó y el sobrenadante se colocó en una placa de cultivo de 96 pocillos. El valor de densidad óptica correspondiente fue detectado por el instrumento Thermo Scientific Multiskan MK3 Enzyme Mark (Waltham, MA, EE. UU.).
2.10. Determinación de la Tasa de Transformación de Linfocitos T
En el segundo día, se inyectaron 8 mg/kg de fitohemaglutinina (PHA) por vía intramuscular a los ratones. Al séptimo día, 2 h después de la administración de la PFVI, se recogieron 40 µL de sangre del seno retroorbital, se colocaron en un portaobjetos y se teñieron con 4-5 gotas de tinción de Wright. El exceso de tinte se enjuagó con agua después de 20 minutos. Utilizando un microscopio, se observaron 100 células. Los linfocitos transformados se calcularon de la siguiente manera: tasa de transformación de linfocitos = linfocitos transformados/número total de linfocitos.
2.11. La respuesta de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH)
La respuesta de DTH se examinó por el grado de inflamación de los oídos. En general, se cree que el grado de hinchazón de los oídos refleja el grado de inflamación . La respuesta DTH se midió de la siguiente manera: En el segundo día, se eliminó 1 cm2 de vello abdominal utilizando Na2S y la piel abdominal se cubrió con 25 µL de solución de 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB). Al sexto día, la piel de la oreja derecha se cubrió con 20 µL de solución de DNFB. Al séptimo día, 2 h después de la administración de la PFVI, se sacrificaron los ratones y se extirparon y pesaron las dos orejas. La diferencia de peso entre las dos orejas determinó el grado de inflamación de las orejas.
2.12. Detección de citocinas TNF-α e IL-10 en suero
En el séptimo día, 2 h después de la administración de la PFVI, la sangre de ratones se obtuvo mediante punción sinusal retroorbital y se coaguló naturalmente durante 15 min a temperatura ambiente. A continuación, la sangre se centrifugó durante 20 minutos y se recogió el sobrenadante. Se detectaron TNF-α e IL-10 en el sobrenadante utilizando kits ELISA (Instituto de Bioingeniería Nanjing Jiancheng, Nanjing, China).
2.13. Detección de Niveles de Superóxido Dismutasa (SOD), Glutatión Peroxidasa (GSH-Px) y Aldehído Dicarboxílico de Metano (MDA)
Al octavo día, se sacrificaron los ratones y se extrajeron los hígados. Después de la molienda y centrifugación, se recolectó el sobrenadante del tejido hepático para la detección de SOD, GSH-px y MDA. Se midieron SOD, GSH-px y MDA utilizando kits ELISA (Instituto de Bioingeniería Nanjing Jiancheng, Nanjing, China).
2.14. Tinción de hematoxilina y Eosina (HE)
La tinción de HE se realizó como se informó anteriormente . Al octavo día, se sacrificaron los ratones y se extrajeron tejidos hepáticos y se fijaron en formalina neutra tamponada al 10%. Después de incrustar en parafina, los tejidos se cortaron en secciones de 5 µm. Luego, los portaobjetos fueron teñidos con HE para determinar los cambios morfológicos. Las imágenes fueron fotografiadas bajo un microscopio de luz (Olympus, Tokio, Japón).
2.15. Análisis estadístico
Los sujetos/preparaciones experimentales se asignaron aleatoriamente a grupos, y se obtuvieron tamaños de grupo iguales. Las asignaciones de grupo, el registro de datos y el análisis de datos no se revelaron al investigador. Los datos se muestran como la media ± DE de al menos cinco experimentos independientes. El ANOVA unidireccional acompañado de la prueba de comparaciones múltiples de Tukey se utilizó para comparaciones múltiples utilizando GraphPad Prism versión 6.0 (Software GraphPad, La Jolla, CA, EE.UU.), y se consideró estadísticamente significativo.
3. Resultados
3.1. Análisis de espectro de FTIR de PFVI
El PFVI se extrajo por eliminación de lípidos a través de acetona, agua caliente combinada con extracción por ultrasonido, precipitación de etanol, eliminación de pigmentos mediante resina macroporosa, desproteinización con el reactivo de corte y eliminación de moléculas pequeñas mediante una bolsa de diálisis, respectivamente. Además, la nueva estructura de polisacáridos se caracterizó por espectroscopia infrarroja. El análisis del espectro FTIR del PFVI se muestra en la Figura 1 (a). El pico ancho característico de 3345 cm-1 correspondía a la vibración de estiramiento de O-H (tal vez incluyendo N-H). El pico de absorción a 2929 cm-1 correspondía al pico de absorción de vibración de estiramiento C-H y al pico de absorción de azúcar. La absorción a 1599 cm-1 indica los modos de vibración de flexión de-OH. El pico a 1412 cm-1 fue el resultado de la presencia de vibraciones de flexión C-H. Además, las absorciones a 1073 cm-1 indicaron los modos de vibración de flexión del estiramiento C-O en la forma del grupo hidroxilo alcohólico.
3.2. Composición de monosacáridos de LVFP
El monosacárido composiciones de la LVFP fueron analizados por la HÍPICA. Como se muestra en las figuras 1 b) y 1 c), todos los monosacáridos existentes en los polisacáridos se identificaron de acuerdo con el tiempo de elución de los patrones de monosacáridos, con referencia a una curva estándar. El PFVI estaba compuesto principalmente de ramnosa, arabinosa, galactosa y glucosa en una proporción molar de 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.
3.3. Determinación de Peso Molecular de LVFP por HPGFC
El peso molecular de la LVFP fue detectado por HPGFC. Dextranos (peso molecular: 180, 2700, 9750, 368000 y 135350 Da) se utilizaron como estándares, ya que son solubles en agua y están disponibles en una amplia gama de masas moleculares. Las normas proporcionaban directrices para estimar el tamaño de la PLVI. Una curva estándar se obtuvo (y = -0.523 x + 13.01, R2 = 0.995). Los resultados demostraron que el peso molecular de la PFVI era de 88.949 Da.
3.4. Efectos de la PFVI sobre los Índices de Timo y Bazo en Ratones Inmunosupresores Inducidos por Cy
Se estableció el modelo de ratón inmunosupresor inducido por Cy para investigar la actividad inmunomoduladora de la PFVI. Cy se administró como inyección intraperitoneal (40 mg/kg) todos los días durante siete días. Después de cinco días de administración de Cy, los ratones exhibieron síntomas como pérdida de cabello, baja excitación, agresión, falta de apetito y pérdida de peso, mientras que no se observó ningún cambio obvio en el grupo de control, lo que indica que el modelo animal se estableció con éxito. Cy + LVFP grupos fueron administrados diferentes concentraciones de la LVFP (100, 200 y 400 mg/kg/día) durante siete días consecutivos. Los índices de bazo y timo reflejan las funciones inmunitarias del organismo . Los efectos de la PFVI en los índices de timo y bazo en ratones inmunosupresores inducidos por Cy se muestran en la Figura 2. En comparación con el grupo de control, el grupo Cy mostró una disminución significativa en los índices de timo y bazo. La administración de PFVI aumentó significativamente estos índices de forma dependiente de la dosis. Estos resultados sugirieron que la PFVI podría afectar los órganos inmunitarios para mejorar la inmunidad.
(un)
(b)
(a)
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3.5. Los efectos de la PFVI en la Fagocitosis de neutrófilos en Ratones Inmunosupresores inducidos por Cy
Los neutrófilos son una defensa eficaz contra los microorganismos invasores . La fagocitosis es una estrategia clave para los neutrófilos en la eliminación de patógenos . Se examinaron la tasa fagocítica y el índice fagocítico para investigar la activación de neutrófilos . Como se muestra en la Figura 3, en comparación con el grupo control, el grupo Cy tuvo una reducción significativa de la tasa fagocítica y del índice fagocítico, lo que sugiere un estado inmunosupresor. La administración de PFVI (200 mg / kg y 400 mg / kg) alivió significativamente estos cambios. Estos resultados sugieren que la LVFP puede mejorar la función fagocítica de los neutrófilos.
(un)
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3.6. Efectos de la PFVI sobre la Inmunidad Humoral y la Inmunidad Celular en Ratones Inmunosupresores inducidos por Cy
La inmunidad humoral es crítica para que el cuerpo combata tumores e infecciones. El nivel sérico de hemolisina se puede utilizar para evaluar la respuesta inmune humoral . La hemolisina sérica disminuyó con el tratamiento con Cy, y este cambio se atenuó significativamente con la PFVI de forma dosis dependiente(Figura 4 (a)). Una variedad de antígenos de la sangre pueden activar los linfocitos T. El PHA puede actuar como un mitógeno para desencadenar la activación y proliferación de células T. El ensayo de transformación de linfocitos T se realizó utilizando sangre de ratón después de la estimulación PHA en presencia o ausencia de la PFVI. Como se muestra en la Figura 4 (b), las tres dosis de la PFVI inhibieron notablemente la reducción inducida por Cy de la tasa de transformación de linfocitos T. La respuesta DTH es una respuesta inmunitaria mediada por células T. La respuesta a la DTH se evaluó midiendo el grado de inflamación de los oídos. Las tres dosis de la PFVI atenuaron notablemente la inhibición inducida por Cy en el grado de inflamación de los oídos(Figura 4 (c)). Estos resultados sugirieron que la PFVI puede activar los linfocitos B y T.
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3.7. Los efectos de la PFVI sobre la expresión de IL-10 y TNF-α en el suero de Ratones Inmunosupresores inducidos por Cy
Las citoquinas secretadas por las células inmunitarias desempeñan un papel vital en la defensa del huésped . La IL-10 y el TNF-α son mediadores inflamatorios clave . Se realizó ELISA para determinar los efectos de la PFVI en la expresión sérica de IL-10 y TNF-α. Nuestros resultados demostraron que las expresiones de IL-10 y TNF-α, después del tratamiento con Cy, disminuyeron significativamente. Administración de PFVI aumento de los niveles de IL-10 y TNF-α de forma dependiente de la dosis (Figura 5).
(un)
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3.8. Efectos de la PFVI sobre el Estrés Oxidativo en Ratones Inmunosupresores inducidos por Cy
Además, este estudio investigó si la PFVI alivió el estrés oxidativo inducido por Cy y el daño hepático. SOD convierte el anión superóxido en H2O2 y O2 para prevenir y neutralizar el daño inducido por radicales libres . Se presume que el GSH-px es una defensa endógena importante contra la destrucción peroxidativa de la membrana celular . El MDA es el producto final de la peroxidación lipídica y puede reflejar el daño oxidativo en el tejido hepático . Las figuras 6 (a) -6(c) demuestran la disminución significativa de las expresiones de SOD y GSH-px, con niveles aumentados de MDA en el tejido hepático después del tratamiento con Cy. La administración de la PFVI, dependiente de la dosis, aumentó los niveles de SOD y GSH-px y disminuyó el nivel de MDA. A continuación, se evaluaron los cambios en la morfología hepática mediante tinción HE. Como se muestra en la Figura 6 (d), en el grupo Cy, las células hepáticas estaban dispersas y desordenadas con el núcleo picnótico. Los sinusoides hepáticos estaban llenos de glóbulos rojos. Como era de esperar, las células hepáticas en el grupo de PFVI se ordenaron de manera ordenada con un nucléolo claro, comparable a las del grupo control. Los resultados indicaron que la LVFP podría atenuar el estrés oxidativo y el daño hepático inducido por Cy.
(un)
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d)
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4. Discusión
En este estudio, se extrajo un polisacárido de la fruta Ligustrum vicaryi L., y se evaluaron sus actividades inmunomoduladoras y antioxidantes. El polisacárido se extrajo con agua caliente combinada con extracción por ultrasonido, precipitación de etanol, eliminación de grasa por acetona, eliminación de pigmentos por resina macroporosa DM101, desprotección con el reactivo de corte (cloroformo/1-butanol, v/v = 4 : 1) y eliminación de moléculas pequeñas utilizando la bolsa de diálisis, respectivamente. Además, esta estructura de polisacáridos se caracterizó por espectroscopia infrarroja, HPGFC-RID y HPIC. Los resultados indicaron que el peso molecular del PFVI es de 88.949 Da, y el PFVI consiste en cuatro monosacáridos, a saber, ramnosa, arabinosa, galactosa y glucosa en la proporción molar de 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.
La inmunosupresión es un estado de disfunción inmune temporal o permanente y puede hacer que un organismo sea más sensible a los patógenos. El desarrollo de nuevos agentes inmunomoduladores es uno de los métodos más eficaces para la prevención y el tratamiento de enfermedades inmunosupresoras . Por ejemplo, los agentes inmunomoduladores combinados con fármacos quimioterapéuticos parecen ser útiles en la terapia del cáncer . Varios informes han indicado correlaciones positivas entre las acciones inmunomoduladoras y los polisacáridos. Ayeka et al. demostró que el regaliz (Glycyrrhiza uralensis Fisch. el polisacárido tiene efectos inmunomoduladores evidentes a través de la activación de poblaciones de células inmunitarias CD4+ y CD8+ y el aumento de la producción de varias citoquinas, como IL-2, IL-6 e IL-7 . Chen et al. polisacáridos aislados de Schisandra sphenanthera y Schisandra chinensis; estos extractos podrían mejorar la actividad fagocítica de los macrófagos y mejorar la inmunidad del cuerpo . Según se informa, se observó que los polisacáridos de Schisandra sphenanthera y Schisandra chinensis estaban compuestos principalmente de arabinosa, glucosa y galactosa, similar a la composición del PFVI. Para investigar si el PFVI poseía funciones inmunomoduladoras, se estableció un modelo de ratón inmunosuprimido inducido por Cy. Cy es un agente quimioterapéutico y se ha utilizado para establecer modelos animales inmunosupresores . A nivel de los órganos inmunitarios, los resultados indicaron que la PFVI aumentó significativamente los índices de bazo y timo en ratones inmunosupresores inducidos por Cy. A nivel de las células inmunitarias, se observó que la PFVI aumentaba la función fagocítica de los neutrófilos y promovía la activación de los linfocitos B y T. Estos datos indican que la LVFP puede mejorar la inmunidad innata y adaptativa.
Además, también se examinaron citoquinas relacionadas con el sistema inmunitario en suero, y los resultados indicaron que la PFVI aumentaba los niveles de IL-10 y TNF-α. Según se informa, varios tipos de polisacáridos pueden influir en la expresión de factores inflamatorios. Chen et al. se observó que polisacáridos sulfatados de microalgas filamentosas Tribonema sp. puede mejorar las expresiones de IL-6, IL-10 y TNF-α en macrófagos . Cheng et al. se informó que los polisacáridos del Lactarius deliciosus silvestre aumentaron la secreción de TNF-α, IL-1β e IL-6 en macrófagos . Wang et al. reportó que el polisacárido del liquen Umbilicaria esculenta indujo la liberación de TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6 e IL-10 en macrófagos murinos .
Los antioxidantes son sustancias que suprimen la oxidación en el cuerpo humano. Por lo general, hay un equilibrio entre la producción de especies reactivas de oxígeno y el sistema de defensa antioxidante, que es indispensable en el metabolismo normal. Las células producen algunos antioxidantes endógenos como SOD y GSH-px para suprimir los radicales libres excesivos . Este estudio determinó la actividad antioxidante de la PFVI en ratones inmunosupresores inducidos por Cy. Los resultados demostraron que la PFVI mostró un aumento significativo en las expresiones SOD y GSH-px. Además, la PFVI disminuyó la expresión de MDA, lo que es indicativo de daño oxidativo en el hígado. La tinción indicó que la PFVI puede aliviar el daño de las células hepáticas inducido por Cy. Por lo tanto, se puede concluir que la PFVI podría proteger a las células del daño inducido por el estrés oxidativo al mejorar la producción de antioxidantes como SOD y GSH-px. Investigaciones previas han demostrado que el contenido de ramnosa, arabinosa y galactosa en la composición de monosacáridos puede afectar la actividad antioxidante . El contenido de ramnosa, arabinosa y galactosa en la LVFP es mayor, lo cual puede ser importante para consolidar la actividad antioxidante demostrada por la LVFP.
En general, se extrajeron polisacáridos del fruto del Ligustrum vicaryi L. y se investigaron sus características físicas y biológicas. El PFVI podría explorarse como un agente inmunomodulador y antioxidante potencial para uso terapéutico en enfermedades inmunosupresoras, lo que permitiría la introducción de la medicina tradicional china en el mercado internacional.
5. Conclusiones
En conclusión, el PFVI fue extraído y purificado del fruto del Ligustrum vicaryi L. con un peso molecular de 88.949 Da y consistió en cuatro monosacáridos, a saber, ramnosa, arabinosa, galactosa y glucosa. Estudios farmacológicos preliminares indicaron que la PFVI podía mejorar eficazmente las funciones inmunitarias y tenía actividad antioxidante. Este estudio demuestra que la PFVI puede ser un agente inmunomodulador y antioxidante prometedor para terapias farmacéuticas (Figura 7).
Disponibilidad de los datos
Los datos TIF utilizados para respaldar los hallazgos de este estudio están disponibles a petición del autor correspondiente.
Conflictos de intereses
Los autores declaran que no existen conflictos de intereses con respecto a la publicación de este artículo.
Reconocimientos
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81800399), el Fondo de Inicio de Investigación de Doctorado de la Universidad Médica de Jining, el Fondo para el Proyecto de Capacitación en Innovación y Emprendimiento de Estudiantes Universitarios a Nivel Nacional (201610443011), el Programa de Desarrollo de Ciencia y Tecnología de Medicina Tradicional China de Shandong (2019-0450) y el Programa de Capacitación cx2016011/cx2019092).