absztrakt
a Ligustrum vicaryi L. A Ligustrum ovalifolium Hassk hibridje. var. aureo-marginatum és Ligustrum vulgale L., az Oleaceae családba tartozik. Arany levelei miatt gyakran díszcserjeként használják. Orvosi értékét azonban még nem fedezték fel. A közelmúltban a növényi poliszacharidok biológiai tulajdonságaik miatt átfogó figyelmet szenteltek, beleértve az immunmoduláló és antioxidáns aktivitást. A tanulmány célja a poliszacharid kivonása, tisztítása és jellemzése A Ligustrum vicaryi L. gyümölcsből, valamint immunmoduláló és antioxidáns aktivitásának vizsgálata. A Ligustrum vicaryi L. gyümölcs poliszacharidot (lvfp) ultrahangos extrakcióval, etanol kicsapással, makroporózus gyanta elválasztással és dialízis zsák tisztításával nyertük. Az LVFP fizikai-kémiai tulajdonságait Fourier-transzformációs infravörös spektrometriával, nagy teljesítményű ionkromatográfiával és nagy teljesítményű gélszűrő kromatográfiával tisztáztuk. Az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP ramnózból, arabinózból, galaktózból és glükózból állt 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54 arányban, molekulatömege pedig 88 949 Da volt. Az LVFP immunmoduláló és antioxidáns aktivitását ciklofoszfamid- (Cy-) indukálta immunszuppresszált egér modellel vizsgálták. Az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP szignifikánsan növelte a lép-és csecsemőmirigy-indexeket, fokozta a neutrofilek fagocitikus funkcióját, aktiválta a B-és T-limfocitákat, valamint az IL-10 és a TNF-ons emelkedett szérumszintjét. Ezenkívül megfigyeltük, hogy az LVFP enyhítette a CY által kiváltott májkárosodást a szuperoxid-diszmutáz (sod) és a glutation-peroxidáz (GSH-px) szintjének növelésével. Ezek az eredmények arra utaltak, hogy az LVFP immunmoduláló és antioxidáns hatású, ezért megalapozza az LVFP alkalmazását a gyógyszeriparban és a funkcionális élelmiszeriparban.
1. Bevezetés
az immunmodulátorok megelőző vagy terápiás stratégiákként alkalmazhatók, fokozva vagy elnyomva a gazdaszervezet védelmi válaszát. Az immunmoduláló és antioxidáns funkcióval rendelkező természetes termékeket széles körben használják számos betegség kezelésére, beleértve az autoimmun betegségeket, a gyulladásos rendellenességeket és a rákot . Az utóbbi időben egyre nagyobb az érdeklődés az olcsó és kevésbé mérgező természetes termékek iránt a szintetikus kemoterápiás szerek használata iránt.
a Ligustrum vicaryi L. A Ligustrum ovalifolium Hassk hibridje. var. aureo-marginatum és Ligustrum vulgale L., az Oleaceae családba tartozik . Klorofill-mentes fenotípust mutat, és aranylevelei miatt széles körben használják kertészeti cserjeként. A gázcsere jellemzői és a klorofill fluoreszcencia válaszok szerint a Ligustrum vicaryi L. ellenáll az SO2-nek, és így felhasználható a Cd-szennyezett talaj fitostabilizálására . Bár a Ligustrum vicarii L. magas díszítő és környezetvédelmi értékkel rendelkezik, terápiás potenciálja még nem tisztázott.
a növényi poliszacharidok, a hagyományos gyógynövényekben gyakran előforduló fontos biológiai makromolekulák egy csoportja számos biológiai tevékenységet mutat, beleértve az antioxidáns, immunmoduláló, antiaging, tumorellenes és gyulladáscsökkentő tevékenységeket . Az elmúlt években számos tanulmány foglalkozott a növényi poliszacharidok kinyerésével és bioaktivitásának elemzésével. Növényi gyümölcs poliszacharidok a leggyakrabban kutatott, beleértve a zsidótövisbogyó poliszacharidok, datolyaszilva poliszacharidok, és görögdinnye poliszacharidok . Legjobb tudomásunk szerint a Ligustrum vicaryi L. gyümölcs poliszacharidok (lvfps) előkészítésén és bioaktivitásán alapuló tanulmányról nem számoltak be.
ebben a vizsgálatban az LVFP-t extraháltuk és tisztítottuk. Ezután elemeztük az LVFP molekulatömegét és monoszacharid összetételét. Ezenkívül az LVFP biológiai funkcióit ciklofoszfamid- (Cy-) indukált immunszuppresszált egér modellben értékelték. Az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP immunmoduláló képességgel rendelkezik mind a veleszületett, mind az adaptív immunitás aktiválásával. Ezenkívül az lvfp antioxidáns aktivitást mutatott a szuperoxid-diszmutáz (sod) és a glutation-peroxidáz (GSH-px) növelésével. Ez a tanulmány elméleti alapot mutatott be az LVFP alternatív terápiás gyógyszerként történő kifejlesztéséhez immunrendszeri betegségek.
2. Anyagok és módszerek
2.1. Állatjóléti és etikai nyilatkozatok
minden kísérleti eljárás megfelelt az ARRIVE (animal research: reporting in vivo experiments) Irányelvek ajánlásainak . A Jining Orvostudományi Egyetem intézményi állatgondozási és használati Bizottsága jóváhagyta az eljárásokat. Minden kísérleti eljárást a lehető legemberibb módon hajtottak végre. Összesen 100 egészséges, 20-25 g súlyú hím Kunming egeret helyeztek el olyan körülmények között, amelyek 12 órán át sötét fényű mesterséges ciklust tartottak fenn, táplálékkal és vízzel ad libitum. Az állatokat standard állatszobákban helyezték el, ahol a hőmérséklet 20-22 C, a páratartalom pedig 55-60% volt.
2.2. Poliszacharid extrakciója és tisztítása
Ligustrum vicaryi L. a gyümölcsöket a Jining Orvostudományi Egyetem (Rizhao, Shandong, Kína) botanikus kertjéből nyerték, és jianan Wang (orvosi Botanikus, gyógyszerészeti Iskola, Jining Orvostudományi Egyetem) azonosította. A szárított Ligustrum vicaryi L. gyümölcsöket 40 hálós szitán átszitálták. A port acetonba merítettük (a por és az aceton aránya 1 : 3 volt), és 24 órán át ráztuk a lipidek eltávolítása érdekében. A felülúszót eldobták, a maradékot pedig a sütőben szárították. A poliszacharidot desztillált vízzel extraháltuk 8 : 1 (v/w) 50-nél 60 percig 250 W ultrahangos teljesítmény alkalmazásával. A vízkivonatot pamut segítségével szűrjük. A maradékot 3000 fordulat / perc centrifugálás után 3 percig eltávolítottuk. Ezután a koncentrált felülúszót 70% – os etanollal kicsapjuk, majd ezt a folyamatot 95% – os etanollal megismételjük. A felülúszó eltávolítása után desztillált vizet adtunk az extraktum feloldásához, majd a maradékot centrifugálással eltávolítottuk. A DM101 makroporózus gyantát használtuk a pigment eltávolítására. A Sevage reagens (kloroform/1-butanol, v / v = 4 : 1) a fehérje eltávolítására használták, amíg a coomassie Brilliant Blue g-250 detektálásával nem észleltek elszíneződési reakciót. A poliszacharidokat 24 órán át fagyasztószárítóba helyeztük a fagyasztott por előállításához. A poliszacharidban lévő kis molekulákat két napig dialízis zsák (molekuláris határérték 3500 Da) alkalmazásával távolítottuk el, és desztillált vizet cseréltünk 12 óránként. az Lvfp tisztításához Sephadex g-200 Oszlopkromatográfiát használtunk. Az Antron-kénsav vizsgálatot glükóz standard görbével alkalmaztuk az LVFP tisztaságának meghatározására.
2.3. Fourier-transzformációs infravörös (FTIR) analízis
az LVFP-t tiszta kálium-bromidporral kevertük, majd az elegyet acháthabarcsba helyeztük, és egyenletesen őröltük egy infravörös lámpa alatt. A keveréket az Irtracer-100 Fourier-transzformációs infravörös spektrométer (Shimadzu, Japán) segítségével értékeltük.
2.4. Nagyteljesítményű Ionkromatográfia (HPIC)
a HPIC analízishez 5 mg LVFP-t feloldottunk 1 mL 2 mol/L trifluor-ecetsavban, és hidrolízishez 121 kb 2 óra hosszat nyomva tartottuk. Ezt követően az elegyet 0,45 MHz-es mikroporózus szűrőmembrán segítségével szűrjük. A monoszacharidok kromatográfiás szétválasztását az ICS-5000 ionkromatográfon végezték, amely CarboPac PA20 oszlop-és impulzusamperdetektorral volt felszerelve. Az ionkromatográfiás elválasztási feltételeket nyolc monoszacharid standard (fukóz, ramnóz, arabinóz, galaktóz, glükóz, xilóz, mannóz és fruktóz) keverékére módosítottuk és teszteltük. A kiváló elválasztást gradiens elúcióval kaptuk, állandó áramlási sebességgel 0,5 mL / perc. A mozgófázis 250 mM NaOH (A), víz (1 M NaAc%, v/v, B) és víz (C) volt. Az elúciót a következőképpen hajtottuk végre: 2.0% A 0 61 percnél; 2,0% A és 5,0% B 21,1 percnél; 2,0% a és 20% B 21,1 30 percnél; és 80% A 30,1 50 percnél.
2.5. Nagy teljesítményű Gélszűrő kromatográfia (HPGFC)
a poliszacharid molekulatömegét a HPGFC (Waters, New York, USA) elemezte, és felszerelte a RID (2414 törésmutató detektor) és az Empower 3 munkaállomás. A kromatográfiás körülmények a következők voltak: kromatográfiás oszlop: Ultrahidrogél, lineáris, 300 mm, 7,8 mm, 2, mozgófázis: 0,1 m NaNO3, áramlási sebesség: 0,9 mL / perc, oszlophőmérséklet: 45, C. A mintát folyadékfázisban oldottuk, majd mikroporózus szűrőmembránnal szűrtük. A kalibrációs görbéhez használt molekulatömeg-szabványok a következők voltak: MW135350, MW36800, MW9750, MW2700 és MW180.
2.6. Ciklofoszfamid – (Cy -) indukált immunszuppresszív egér modell és LVFP alkalmazás
összesen 100 egeret véletlenszerűen öt csoportra osztottunk: kontroll, CY, Cy + LVFP (100 mg/kg/nap), Cy + LVFP (200 mg/kg/nap) és Cy + LVFP (400 mg/kg/nap). A kontrollcsoport normál sóoldatot kapott, a másik négy csoportot pedig intraperitoneálisan injektálták Cy-vel (40 mg/kg) minden nap hét napig. Az LVFP-t intragasztrikus beadással adták be hét egymást követő napon keresztül.
2.7. A lép és a csecsemőmirigy indexek meghatározása
minden egeret lemértek és feláldoztak 24 órával az utolsó gyógyszer beadása után. A lépet és a csecsemőmirigyet kivágták és lemérték. A lép vagy a csecsemőmirigy indexet a lép vagy a csecsemőmirigy súlyának a testtömeghez viszonyított arányában fejeztük ki.
2.8. Az egér neutrofilek fagocitikus funkciójának meghatározása
Staphylococcus aureus-t használtunk a neutrofilek fagocitózisának értékelésére. Röviden, Az lvfp beadását követően egerekből 40 ~ ml vért nyertek, és heparin csőbe helyezték, hogy megakadályozzák a véralvadást. Ezután a fent említett csőbe 40 db 6CL baktériumszuszpenziót adtunk. Az elegyet egyenletesen bevonjuk üveglemezekre, és szobahőmérsékleten tartjuk 0,5 órán át. ezután az elegyet 2-3 csepp metanollal rögzítjük 5 percig, majd 4-5 csepp Wright foltjával festjük 5 percig. Összesen 100 neutrofilt figyeltek meg és regisztráltak. A neutrophil fagocitikus arányt és a neutrophil fagocitikus indexet a következőképpen számítottuk ki: a neutrophil fagocitikus ráta = a fagocitikus funkciót mutató neutrophilek száma/a neutrophilek összes száma és a neutrophil fagocitikus index = a neutrophilek által elnyelt baktériumok teljes száma/a neutrophilek összes száma.
2.9. A szérum hemolizin meghatározása ELISA-val
a negyedik napon a csirke vörösvérsejt (CRBC) szuszpenzió 5% – át intraperitoneálisan injektáltuk az egerekbe (0,1 mL/10 g). A hetedik napon, 2 órával az LVFP beadása után, 1 mL egér vért kaptunk, és 10 percig centrifugáltuk. Ezután 40 ml szérumot adtunk 2 mL normál sóoldathoz. Egy mL 10% – os tengerimalac szérumot és 1 mL 5%-os CRBC szuszpenziót adtunk a szérumhoz, majd vízfürdőben inkubáltuk 37 oc-n 0,5 órán át. az elegyet centrifugáltuk, és a felülúszót egy 96 lyukú tenyésztőlemezbe helyeztük. A megfelelő optikai sűrűségértéket a Thermo Scientific Multiskan Mk3 Enzyme Mark műszer (Waltham, MA, USA) detektálta.
2.10. A T-limfocita transzformációs sebesség meghatározása
a második napon az egereket intramuszkulárisan injektáltuk 8 mg/kg fitohemagglutinin (PHA). A hetedik napon, 2 órával az LVFP beadása után, 40 6CL vért gyűjtöttek a retroorbitális sinusból, egy diára helyezték, és 4-5 csepp Wright-foltot festettek. A felesleges festéket 20 perc elteltével vízzel leöblítettük. Mikroszkóp segítségével 100 sejtet figyeltek meg. A transzformált limfocitákat a következőképpen számítottuk ki: limfocita transzformációs sebesség = transzformált limfociták/a limfociták teljes száma.
2.11. A késleltetett típusú túlérzékenységi (DTH) választ
a DTH választ a fülduzzanat mértéke alapján vizsgáltuk. Általában úgy gondolják, hogy a fülduzzanat mértéke tükrözi a gyulladás mértékét . A DTH választ a következőképpen mértük: a második napon 1 cm2 hasi szőrt távolítottak el Na2S alkalmazásával, és a hasi bőrt 25 db 6-fluoro-2,4-dinitrobenzol (DNFB) oldattal borították be. A hatodik napon a jobb fül bőrét 20 ml dnfb oldattal vontuk be. A hetedik napon, 2 órával az LVFP beadása után az egereket feláldozták, és a két fülét kivágták és lemérték. A két fül közötti súlykülönbség meghatározta a fülduzzanat mértékét.
2.12. A TNF-ons és az IL-10 citokinek kimutatása a szérumban
a hetedik napon, 2 órával az LVFP beadása után, az egerek vérét retroorbitális sinus punkcióval nyerték, és szobahőmérsékleten 15 percig természetes módon koagulálták. Ezután a vért 20 percig centrifugáltuk, majd a felülúszót összegyűjtöttük. A felülúszóban a TNF-xhamstereket és az IL-10-et ELISA-készletekkel detektálták (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kína).
2.13. A szuperoxid-diszmutáz (sod), a glutation-peroxidáz (GSH-Px) és a metán-Dikarboxil-aldehid (MDA) szintjének kimutatása
a nyolcadik napon az egereket feláldozták és a májat extrahálták. Őrlés és centrifugálás után a májszövet felülúszóját összegyűjtöttük SOD, GSH-px és MDA kimutatására. A SOD, a GSH-px és az MDA méréseket ELISA készletekkel végezték (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kína).
2.14. Hematoxilin és eozin (HE) festést
HE festést végeztek, amint azt korábban jelentették . A nyolcadik napon az egereket feláldozták, és a májszöveteket kivonták és 10% semleges pufferolt formalinban rögzítették. A paraffinba történő beágyazást követően a szöveteket 5 6 mm-es szakaszokra vágtuk. Ezután a diákat HE-vel festették a morfológiai változások meghatározására. A képeket fénymikroszkóp alatt fényképezték (Olympus, Tokió, Japán).
2.15. Statisztikai elemzés
a kísérleti alanyokat/készítményeket véletlenszerűen csoportokba soroltuk, és egyenlő csoportméreteket kaptunk. A csoportfeladatokat, az adatrögzítést és az adatelemzést nem közölték a vizsgálóval. Az adatokat legalább öt független kísérletből származó átlagos SD-ként mutatjuk be. Az egyirányú ANOVA-t Tukey többszörös összehasonlítási tesztjével együtt több összehasonlításhoz használták a GraphPad Prism 6.0 verzióját (GraphPad Software, La Jolla, CA , USA), és statisztikailag szignifikánsnak tekintették.
3. Eredmények
3.1. Az LVFP FTIR Spektrumanalízise
az LVFP-t acetonnal történő lipideltávolítással, ultrahangos extrakcióval kombinált forró vízzel, etanolos kicsapással, pigmenteltávolítással makroporózus gyantával, a Sevage reagenssel történő proteinmentesítéssel, illetve kis molekulájú dializáló tasakkal extraháltuk. Ezenkívül az új poliszacharid szerkezetet infravörös spektroszkópia jellemezte. Az LVFP FTIR spektrumanalízise az 1(a) ábrán látható. A jellegzetes széles csúcs 3345 cm−1-nél megfelelt az O-H (talán az N-H-t is beleértve) nyújtási rezgésnek. A 2929 cm−1-es abszorpciós csúcs megfelelt a C-H nyújtó rezgéselnyelési csúcsnak és a cukorabszorpciós csúcsnak. Az 1599 cm−1-es abszorpció az-OH hajlítási rezgési módjait jelezte. Az 1412 cm−1-es csúcsot a C-H hajlító rezgés jelenléte okozta. Ezenkívül az 1073 cm−1-es abszorpciók jelezték a C-O nyújtás hajlító rezgési módjait az alkoholos hidroxilcsoport formájában.
3.2. Az LVFP monoszacharid összetétele
az LVFP monoszacharid összetételét HPIC-vel elemeztük. Amint azt az 1.b) és 1. c) ábra mutatja, a poliszacharidokban létező összes monoszacharidot a monoszacharid standardok elúciós idejének megfelelően azonosítottuk, egy standard görbe alapján. Az LVFP főleg ramnózból, arabinózból, galaktózból és glükózból állt, mólaránya 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54 volt.
3.3. Az LVFP molekulatömegének meghatározása HPGFC-vel
az LVFP molekulatömegét a HPGFC detektálta. Dextránok (molekulatömeg: 180, 2700, 9750, 368000 és 135350 Da) szabványként használták, mivel vízben oldódnak és széles molekulatömegben állnak rendelkezésre. A szabványok iránymutatásokat adtak az LVFP méretének becsléséhez. Standard görbét kaptunk (y = -0,523 x + 13,01, R2 = 0,995). Az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP molekulatömege 88 949 Da volt.
3.4. Az LVFP hatása a Thymus és a lép indexeire Cy által indukált immunszuppresszív egerekben
a Cy által indukált immunszuppresszált egér modellt az LVFP immunmoduláló aktivitásának vizsgálatára hozták létre. A Cy-t intraperitoneális injekcióként (40 mg/kg) adták be minden nap hét napig. Öt napos CY-kezelés után az egerek olyan tüneteket mutattak, mint a hajhullás, az alacsony izgalom, az agresszió, a rossz étvágy és a fogyás, míg a kontrollcsoportban nem figyeltek meg nyilvánvaló változást, ami azt jelzi, hogy az állatmodell sikeresen létrejött. A Cy + LVFP csoportokat az LVFP különböző koncentrációiban (100, 200 és 400 mg/kg/nap) adták be hét egymást követő napon keresztül. A lép és a thymus indexek tükrözik a szervezet immunfunkcióit . A CY által indukált immunszuppresszív egerekben a thymus és a lép indexére gyakorolt LVFP hatásokat a 2.ábra mutatja. A kontroll csoporthoz képest a CY csoport szignifikáns csökkenést mutatott a thymus és a lép indexében. Az LVFP alkalmazása dózisfüggő módon jelentősen növelte ezeket az indexeket. Ezek az eredmények arra utaltak, hogy az LVFP befolyásolhatja az immunszerveket az immunitás fokozása érdekében.
(a)
(b)
a)
b)
3.5. Az LVFP hatása a neutrofil fagocitózisra a Cy által kiváltott immunszuppresszív egerekben
a neutrofilek hatékony védelmet nyújtanak a behatoló mikroorganizmusok ellen . A fagocitózis a neutrofilek kulcsfontosságú stratégiája a kórokozók elpusztításában . A fagocitikus sebességet és a fagocitikus indexet vizsgálták a neutrofilek aktivációjának vizsgálata céljából . Amint azt a 3. ábra mutatja, a kontroll csoporthoz képest a Cy csoport szignifikánsan csökkentette a fagocitikus arányt és a fagocitikus indexet, ami immunszuppresszív státusra utal. Az LVFP (200 mg/ttkg és 400 mg/ttkg) alkalmazása jelentősen enyhítette ezeket a változásokat. Ezek az eredmények arra utaltak, hogy az LVFP fokozhatja a neutrofilek fagocitikus funkcióját.
(a)
(b)
a)
b)
3.6. Az LVFP hatása a humorális immunitásra és a celluláris immunitásra Cy által indukált immunszuppresszív egerekben
a humorális immunitás kritikus fontosságú a szervezet számára a daganatok és fertőzések elleni küzdelemben. A szérum hemolizinszint felhasználható a humorális immunválasz értékelésére . A szérum hemolizint a Cy-kezelés csökkentette, és ezt a változást az LVFP dózisfüggő módon jelentősen gyengítette (4(A) ábra). A vérből származó különféle antigének aktiválhatják a T-limfocitákat. A PHA mitogénként működhet, amely kiváltja a T-sejtek aktiválódását és proliferációját . A T-limfocita transzformációs vizsgálatot egérvérrel végeztük Pha stimuláció után az LVFP jelenlétében vagy hiányában. Amint azt a 4(b) ábra mutatja, az LVFP mindhárom dózisa jelentősen gátolta a T-limfocita transzformációs sebesség Cy-indukálta csökkenését. A DTH válasz egy T-sejt által közvetített immunválasz . A DTH választ a fülduzzanat mértékének mérésével értékelték. Az LVFP mindhárom dózisa jelentősen gyengítette a CY által kiváltott gátlást a fülduzzanat fokában(4.ábra (c)). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az LVFP képes aktiválni a B és T limfocitákat.
(a)
(b)
(c)
a)
b)
c)
3.7. Az LVFP hatása a CY által indukált immunszuppresszív Egerek
szérumában az IL-10 és a TNF-ons expressziójára az immunsejtek által kiválasztott citokinek létfontosságú szerepet játszanak a gazdaszervezet védekezésében . Az IL-10 és a TNF-fő gyulladásos mediátorok . ELISA-val vizsgálták az LVFP hatását az IL-10 és a TNF-ons szérumexpressziójára. Eredményeink azt mutatták, hogy az IL-10 és a TNF-ons expressziók a Cy kezelés után szignifikánsan csökkentek. Az LVFP alkalmazása dózisfüggő módon megemelte az IL-10 és a TNF-ons-szintek emelkedését (5.ábra).
(a)
(b)
a)
b)
3.8. Az LVFP hatása az oxidatív stresszre Cy által indukált immunszuppresszív egerekben
Továbbá ez a vizsgálat azt vizsgálta, hogy az LVFP enyhítette-e a Cy által kiváltott oxidatív stresszt és a májkárosodást. A SOD átalakítja a szuperoxid aniont H2O2-vé és O2-vé, hogy megakadályozza és semlegesítse a szabad gyökök által okozott károsodást . Feltételezzük, hogy a GSH-px fontos endogén védelem a sejtmembrán peroxidatív pusztulása ellen . Az MDA a lipidperoxidáció végterméke, amely tükrözi a májszövet oxidatív károsodását . A 6(a)-6(c) ábra a szignifikánsan csökkent SOD és GSH-px expressziót mutatja, a májszövetben a CY kezelés után megnövekedett MDA szinttel. Az LVFP dózisfüggő alkalmazása növelte az SOD és GSH-px szinteket, és csökkentette az MDA szintet. Ezután a máj morfológiájának változásait HE festéssel értékeltük. Amint azt a 6(d) ábra mutatja, A Cy csoportban a májsejtek ritkák és rendezetlenek voltak a pyknotikus maggal. A máj szinuszai tele voltak vörösvérsejtekkel. Ahogy az várható volt, az LVFP csoport májsejtjei rendezett módon rendeződtek tiszta nukleolussal, összehasonlítva a kontrollcsoportéval. Az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP csökkentheti a Cy által kiváltott oxidatív stresszt és májkárosodást.
(a)
(b)
(c)
(d)
a)
b)
c)
(d)
4. Vita
ebben a vizsgálatban a Ligustrum vicaryi L. gyümölcsből poliszacharidot vontak ki, és immunmoduláló és antioxidáns aktivitását értékelték. A poliszacharidot forró vízzel extraháltuk ultrahangos extrakcióval, etanol kicsapással, zsír eltávolítással acetonnal, pigment eltávolítással DM101 makroporózus gyantával, proteinmentesítéssel a Sevage reagenssel (kloroform/1-butanol, v/v = 4 : 1), illetve kis molekulájú eltávolítással a dialízis zsák segítségével. Sőt, ezt a poliszacharid szerkezetet infravörös spektroszkópia, HPGFC-RIDÉS HPIC. Az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP molekulatömege 88 949 Da, az LVFP pedig négy monoszacharidból áll, nevezetesen ramnózból, arabinózból, galaktózból és glükózból 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54 mólarányban.
az immunszuppresszió átmeneti vagy tartós immunműködési zavar, amely érzékenyebbé teheti a szervezetet a kórokozókkal szemben. Új immunmoduláló szerek kifejlesztése az egyik leghatékonyabb módszer az immunszuppresszív betegségek megelőzésére és kezelésére . Például a kemoterápiás gyógyszerekkel kombinált immunmoduláló szerek hasznosnak tűnnek a rákterápiában . Számos jelentés pozitív korrelációt mutatott az immunmoduláló hatás és a poliszacharidok között. Ayeka et al. kimutatták, hogy az édesgyökér (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) a poliszacharid immunmoduláló hatást fejt ki a CD4+ és CD8+ immunsejtpopulációk aktiválása és a különböző citokinek, például az IL-2, az IL-6 és az IL-7 fokozott termelése révén . Chen et al. Schisandra sphenanthera és Schisandra chinensis izolált poliszacharidjai; ezek a kivonatok fokozhatják a makrofágok fagocitikus aktivitását és javíthatják a szervezet immunitását . Állítólag megfigyelték, hogy a Schisandra sphenanthera és a Schisandra chinensis poliszacharidjai főként arabinózból, glükózból és galaktózból állnak, hasonlóan az LVFP összetételéhez. Annak vizsgálatára, hogy az LVFP rendelkezik-e immunmoduláló funkciókkal, Cy által kiváltott immunszuppresszált egér modellt hoztak létre. A Cy egy kemoterápiás szer, amelyet immunszuppresszív állatmodellek létrehozására használtak . Az immunszervek szintjén az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP szignifikánsan növelte a lép-és csecsemőmirigy indexeket a Cy által indukált immunszuppresszív egerekben. Az immunsejtek szintjén megfigyelték, hogy az LVFP fokozta a neutrofilek fagocitikus funkcióját, és elősegítette a B és T limfocita aktiválódást. Ezek az adatok azt mutatják, hogy az LVFP fokozhatja mind a veleszületett, mind az adaptív immunitást.
továbbá a szérumban immunszuppresszív citokineket is megvizsgáltak, és az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP növelte az IL-10 és a TNF-ons-szintek emelkedését. Állítólag többféle poliszacharid befolyásolhatja a gyulladásos tényezők expresszióját. Chen et al. megfigyelték, hogy a szálas mikroalgákból származó szulfatált poliszacharidok Tribonema sp. fokozhatja az IL-6, IL-10 és TNF-6 kifejezéseket a makrofágokban . Cheng et al. beszámoltak arról, hogy a vadon élő Lactarius deliciosusból származó poliszacharidok fokozták a TNF -, IL-1-és IL-6-szekréciót a makrofágokban . Wang et al. arról számoltak be, hogy a zuzmó Umbilicaria esculenta-ból származó poliszacharid egér makrofágokban indukálta a TNF-kontinensek, IFN-kontinensek, IL-1-esek, IL-6-asok és IL-10-esek felszabadulását .
az antioxidánsok olyan anyagok, amelyek elnyomják az oxidációt az emberi szervezetben. Általában egyensúly van a reaktív oxigénfajok termelése és az antioxidáns védelmi rendszer között, ami nélkülözhetetlen a normális anyagcserében. A sejtek endogén antioxidánsokat termelnek, mint például a SOD és a GSH-px, hogy elnyomják a túlzott szabad gyököket . Ez a tanulmány meghatározta az lvfp antioxidáns aktivitását Cy által kiváltott immunszuppresszív egerekben. Az eredmények azt mutatták, hogy az LVFP szignifikáns növekedést mutatott a SOD és a GSH-px kifejezésekben. Ezenkívül az LVFP csökkentette az MDA expressziót, ami a máj oxidatív károsodására utal. A festés azt jelezte, hogy az LVFP enyhítheti a CY által kiváltott májsejtkárosodást. Így arra lehet következtetni, hogy az LVFP megvédheti a sejteket az oxidatív stressz okozta károsodástól az antioxidánsok, például a SOD és a GSH-px termelésének fokozásával. Korábbi kutatások kimutatták, hogy a monoszacharid összetételben lévő ramnóz, arabinóz és galaktóz tartalma befolyásolhatja az antioxidáns aktivitást . A ramnóz, az arabinóz és a galaktóz tartalma az LVFP-ben magasabb, ami fontos lehet az lvfp által kimutatott erősebb antioxidáns aktivitás szempontjából.
összességében a Ligustrum vicaryi L. gyümölcsből nyert poliszacharidokat kivontuk, és megvizsgáltuk azok fizikai és biológiai jellemzőit. Az LVFP potenciális immunmoduláló és antioxidáns szerként vizsgálható az immunszuppresszív betegségek terápiás alkalmazásában, lehetővé téve a hagyományos kínai orvoslás bevezetését a nemzetközi piacon.
5. Következtetések
összefoglalva, az LVFP-t a Ligustrum vicaryi L. gyümölcsből extraháltuk és tisztítottuk, amelynek molekulatömege 88 949 Da volt, és négy monoszacharidból, nevezetesen ramnózból, arabinózból, galaktózból és glükózból állt. Az előzetes farmakológiai vizsgálatok azt mutatták, hogy az LVFP hatékonyan javíthatja az immunfunkciókat és antioxidáns aktivitással rendelkezik. Ez a tanulmány bizonyítja, hogy az LVFP ígéretes immunmoduláló és antioxidáns szer lehet A gyógyszerészeti terápiákban (7.ábra).
adatok rendelkezésre állása
a tanulmány megállapításainak alátámasztására használt TIF-adatok kérésre rendelkezésre állnak a megfelelő szerzőtől.
összeférhetetlenség
a szerzők kijelentik, hogy nincs összeférhetetlenség a jelen cikk közzétételével kapcsolatban.
elismerések
ezt a munkát a kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány (81800399), a Jining Orvostudományi Egyetem Doktori kutatási Startup alapja, a nemzeti szintű főiskolai hallgatók Innovációs és Vállalkozási képzési projektje (201610443011), a Shandong hagyományos kínai orvoslás tudományos és Technológiai Fejlesztési Programja (2019-0450), valamint a Jining Orvostudományi Egyetem Hallgatói Innovációs képzési programja (Jining Medical University Student Innovation Training Program) támogatta cx2016011/cx2019092).