Bevezetés
az első kísérletek óta, hogy biológiai variációkat használjunk az emberekben a korai emberi vándorlás megértésének elősegítésére, Európa népesedése volt a fő kutatási fókusz . A Termékeny Félhold mezőgazdaságának mintegy 10 000 évvel ezelőtti fejlődését követően ez a technológia a Közel–Keletről nyugat felé terjedt el Európában , ami jelentős kulturális átmenetet eredményezett a vándorló vadászgyűjtésről az ülő gazdálkodásra, ami drámai népességnövekedéshez vezetett, az úgynevezett neolit átmenet során . Ezen a régészeti kereten belül vita folyik Európa első népeinek és azoknak a modern európai populációkhoz való viszonylagos hozzájárulásáról, akik a neolit átmenet során vándoroltak be, mind genetikai örökségük, mind a migráció és az utódlás folyamatai szempontjából . Az igazi forgatókönyv kétségtelenül sokrétű és összetett. Mind a klasszikus markerek korai munkája a főkomponensek elemzésével, mind az Y kromoszómát használó újabb tanulmányok kimutatták, hogy Európában a genetikai variáció délkelet–északnyugati gradiens mentén oszlik meg. Ilyen megfigyeléseket javasoltak a demikus diffúzió modelljének alátámasztására a neolitikum átmenet Európában (vagyis hogy a mezőgazdaság terjedése a Közel-Keletről érkező emberek ehhez kapcsolódó mozgásával is járt) .
új munka foglalkozott az újkőkori átmenet Európában összpontosítva a fő nyugat-európai Y kromoszóma haplocsoport R1b1b2-M269 (a továbbiakban: R-M269). Ez a leszármazás eddig kevés figyelmet kapott ebben az összefüggésben, bár a korábbi munkák azt sugallták, hogy a tágabb r-M173 klád (kivéve az R1a-M17 alcsaládot) és az 1.haplocsoport (egyetlen nukleotid polimorfizmus, vagy SNP , 92r7) valószínűleg elterjedt Európában a paleolitikum idején, ezért valószínűtlen, hogy a vándorló gazdákkal együtt Európába vitték volna. Balaresque et al. (a továbbiakban ‘Balaresque’) 840 Y kromoszómát használt az R-M269 haplocsoporton belül annak bemutatására, hogy bár ezt a haplocsoportot erős frekvenciájú Klin jellemzi a nyugati magastól a keleti alacsonyig, a kapcsolódó Klin haplotípus sokféleség (átlagos rövid tandem ismétlésként mérve, vagy STR, variancia) az ellenkező irányba mutat. Azt állították, hogy ez a korreláció azzal magyarázható, hogy ennek a vonalnak a Közel-Keletről való újabb szétszóródása egybeesik az Európai neolitikum átmenetével. A származás becslések szerint körülbelül 6000 éves volt a különböző populációkban, ami állítólag összhangban van ezzel a modellel. Ez az eredmény, amint azt bevezetésükben megjegyezték, ‘azt jelzi, hogy az európaiak Y-kromoszómáinak nagy többsége a neolit terjeszkedés’ (2. O.).
Myres et al. számos új SNP mutációt írt le az R-M269 után, amelyek erős földrajzi struktúrát mutatnak a 2043 R-M269 kromoszómák sokkal nagyobb mintájában. Kiemelnek egy alapvetően Európai specifikus kládot, amelyet az SNP m412 (más néven S167) és az L11 (S127) jelenléte határoz meg, amely Nyugat-Európában magas frekvenciákból (több mint 70%) származik, kelet felé csökken. Ez a tanulmány kimutatta, hogy több downstream SNP eloszlása feltűnő frekvenciamintákat mutat, és úgy tűnik, hogy az erősen lokalizált frekvenciák különböző területeiről terjed, amelyek közül néhányat Cruciani et al. . Myres et al. az R-S116 haplocsoport egyesülésének becsült ideje Európa különböző populációiban, és a Balaresque-vel egyetértésben azt sugallta, hogy az R-M269 haplocsoport elterjedhetett a Neolitikummal, pontosabban a Linearbandkeramik, egy újkőkori mezőgazdasági ipar, amely elterjedt egész Észak-Európában, Magyarországtól Franciaországig, körülbelül 7500 évvel ezelőtt.
az STR mutációs rátákat övező jelenlegi bizonytalanság azt mutatja, hogy a legújabb tanulmányok ellenére még mindig nincs konszenzus abban, hogy az R-M269 haplocsoport mikor és hol keletkezett és terjedt el Európában. Még akkor is, ha az Európai Y kromoszóma génkészlet eredetét óvatosan kell vizsgálni, különösen akkor, ha egy ilyen érv csak egyetlen, nem teljesen megoldott haplocsoporton alapul (100 in. oldal), mély érdeklődésre tart számot annak megértése, hogy a nyugat-európai férfiak túlnyomó többsége (több mint 100 millió) hogyan hordozza az R-M269 Y kromoszóma haplocsoporthoz tartozó Y kromoszómákat.
következésképpen ezeket a problémákat saját nagyméretű R-M269 adatkészletünkkel kezeltük, mind önmagában, mind a legfrissebb átfogó felmérés kompatibilis adataival kombinálva . Megmutatjuk, hogy az átlagos STR variancia és a hosszúság közötti alapvető kapcsolat, amely a neolitikum hipotézisének alátámasztására vonatkozó közelmúltbeli állítás alapja , nem áll fenn nagyobb és földrajzilag szélesebb mintánkra. Azt is elmagyarázzuk, hogy ez a korábbi elemzés hogyan vezethette ezt a hamis asszociációt. Végül feltárjuk az R-M269 Európai specifikus alvonalhoz kapcsolódó genetikai sokféleség térbeli eloszlását, amelyet az SNP s127 határoz meg, a mikroszatellit variáció lényegében homogén hátterét mutatva több különböző alvonal szintjén, egy 10 Str-ből álló közös készlet alapján, amelyet 2000 R-M269 kromoszómára gépeltek.
a bizonytalanság elismerése mellett a kutatók általában az Y kromoszóma vonalak életkorát jelentik az egyének közötti különbségek alapján több Str-ben, gyakran az átlagos négyzet távolság (ASD) vagy a kapcsolódó összefoglaló statisztikák felhasználásával, mint a koaleszcencia idő elfogulatlan becslői, T. megvizsgáltuk, hogy az ASD hogyan változik az adatkészletünkben az Str-k különböző halmazai alapján. A közhiedelemmel ellentétben az ASD, tehát a T becslései nagyon eltérőek, ha az Str-k különböző részhalmazait használják ugyanazzal a mintával. Míg a legújabb bizonyítékok fokozták az R-M269 neolitikum elterjedésének támogatását, arra a következtetésre jutunk, hogy jelenleg nem lehet hiteles becslést készíteni a divergencia idejéről a legújabb tanulmányokban használt Y-Str-k halmaza alapján. Továbbá, megmutatjuk, hogy az Y-STRs tulajdonságai, nem a önmagában használt szám, úgy tűnik, hogy ellenőrzik a divergencia időbecslések pontosságát, attribútumok, amelyek ritkán vannak, ha valaha, a gyakorlatban figyelembe veszik.
anyag és módszerek
(a) Etikai nyilatkozat
a mintában szereplő összes férfi tájékozott beleegyezést adott a különböző egyetemek etikai bizottságainak etikai jóváhagyását követően, ahol a mintákat összegyűjtötték.
(B) DNS minták és genotipizálás
2486 R-M269 Y kromoszómát gyűjtöttünk össze Európa-szerte, a Közel-Keleten és Nyugat-Ázsiában, 6503 teljes populációból, amelyek mind új, mind korábban publikált Y kromoszómákat tartalmaztak. Az R-M269 és a különböző al-haplocsoportok gyakorisági eloszlásának felméréséhez Európában és Ázsiában összevontuk adatainkat Myres és mtsai adataival. , amely 4529 R-M269 kromoszómából álló kombinált készletet adott 16 298 teljes mintából 172 különböző populációból (elektronikus Kiegészítő anyag, S1 táblázat és S1 ábra). A következő SNP-k gyakoriságát állapították meg, amelyek törzsfejlődését az 1.ábra mutatja: S127/L11 (rs9786076), S21/U106 (rs16981293), S116 (rs34276300), S145/M529 (rs11799226) és S28/U152 (rs1236440). A mintákat standard PCR reakcióval amplifikáltuk, és a SNaPshot Multiplex rendszer (Life Technologies Corp., Carlsbad, CA, USA) primer extension protokollt használtuk az egyes SNP lókuszokban jelen lévő allél jellemzésére. Minden alapozó szerepel az elektronikus kiegészítő anyagban.
az ebben a tanulmányban beírt egyének többségénél (2289) a következő 10 Str állt rendelkezésre: DYS19; DYS389I; DYS389b (kivonva a DYS389I-nél pontozott allélokat a DYS389II lókuszból); DYS390; DYS391; DYS392; DYS393; DYS437; DYS438; és DYS439, vagy korábban közzétették, vagy mi magunk gépeltük be az Yfiler kit (Life Technologies Corp.) vagy a Dys4filer kit (Life Technologies Corp.) segítségével Promega powerplex assay (promega corp., Madison, WI, USA). A Weale et al. , csak öt Str-t publikáltak korábban,így a fennmaradó ötöt egy belső tervezésű és ellenőrzött multiplexszel gépelték be a Butler et al. a DYS391, a DYS437, a DYS389I és a II és a DYS439, valamint a Gusmao & Alves vizsgálatából származó primerek a DYS438 esetében. A DYS391 hívásokat arra használták, hogy ellenőrizzék az eredeti haplotípusokkal való összhangot Weale et al. Három Weale et al. a populációkat nem gépelték tovább ezekre az Str-kre (114 egyed). Az Yfiler kit (1035) segítségével gépelt személyeket használták az STR szelekció ASD számításokra gyakorolt hatásának vizsgálatára (elektronikus Kiegészítő anyag, S2 táblázat).
a frekvenciatérképek elkészítéséhez 30 vagy annál nagyobb teljes méretű populációkat használtunk (elektronikus Kiegészítő anyag, S1 ábra). A varianciát csak azokra a populációkra számították ki, ahol a haplotípusok legalább rendelkezésre álltak 10 egyének az adott haplocsoporton belül.
(C) elemzés
az SNP frekvenciák térképeit az ArcMap GIS segítségével jelenítettük meg (v. 9.2; ESRI). Az interpolációt az inverz távolság súlyozási eljárással végeztük. Az összes populáció szélességi és hosszúsági foka a mintákhoz társított legnagyobb felbontású mintavételi központon alapult,és az elektronikus Kiegészítő anyag, az S1 táblázat mutatja.
az R statisztikai csomagot használtuk a medián STR variancia kiszámításához (a lokuszon belüli ismétlések számának varianciája az összes lókuszra átlagolva) a populáción belüli összes egyén között, 1000 bootstrap replikációt követően, az egyének helyettesítésével. Regresszióanalízist végeztünk R-ben, hogy összehasonlítsuk az átlagos STR varianciát az R-M269, R-M269(xS127) és R-S127 haplocsoportok szélességi és hosszúsági fokával.
megvizsgáltuk, hogy az ASD becslései hogyan változnak a mintánkban, amikor az Str-k különböző kombinációit használjuk két különböző kritérium alapján: mutációs ráta, 6; és megfigyelt linearitás, 6(R) (1.táblázat). A 15 Str-t sebességskálán rangsoroltuk, a hét leggyorsabb és hét leglassabb sebesség alapján pedig külön számítottuk ki az ASD-t (elektronikus Kiegészítő anyag, S4 táblázat). Második kritériumunk a linearitás becsült időtartamán alapult, D, különböző Str-csoportok. A linearitás időtartama annak a divergencia-időnek a becslése, amely után az ASD idővel lineárisan növekszik. Szigorú lépésenkénti modell alatt mutáló Str-k esetében Goldstein et al. megmutatta, hogy az ASD kezdetben lineárisan növekszik az idővel, de ezt a linearitást korlátozza az STR által elvégezhető ismétlések maximális száma, R . A D – t közelítjük a(R) és a (R) és a (D) egyszerű átalakításával, valamint a (Ne) effektív populációmérettel (eqns 3 és 4 in). Ha az STRs-t nagyobb számú, ha az strs-t nagyobb számú, (r)/2) számú, akkor a linearitást tovább kell feltételezni a múltban, és az ezekből az Str-kből kiszámított ASD-t kevésbé valószínű, hogy alábecsülik a telítettség következtében. Az 1. táblázat és az elektronikus kiegészítő anyagok, az S4. táblázat az alkalmazott Str-k különböző csoportjait és a hozzájuk tartozó értékeket mutatja be a(D), (R), (R)/(2) és (ASD).
annak ellenőrzésére, hogy a legutóbbi közös ős (tmrca) becsléshez viszonyított időbeli különbségek nem specifikusak-e az ASD-n alapuló módszerekre, BATWINGOT használtunk a HGDP beduin populáción, amelyre nagyobb számú Y-Str (n = 65) állt rendelkezésre . Négy különböző Str-készletet hasonlítottunk össze a linearitás becslésének különböző időtartamával (elektronikus Kiegészítő anyag).
eredmények
az R-M269 leszármazási vonal európai eredetének vizsgálatához 4529 R-M269 kromoszómából álló nagy adatkészletet elemeztünk (ebből 2486 kromoszómát még nem publikáltak ilyen részletes felbontásban) több európai, Közel-keleti és nyugat-ázsiai populációból (elektronikus Kiegészítő anyag, S1 ábra és S1 táblázat). Európán belül az R–M269 északnyugati-délkeleti frekvenciáját figyeltük meg , hasonlóan a korábban megfigyeltekhez, a nyugat-európai magas frekvenciáktól a keleti alacsonyabb frekvenciákig. Az R-M269 haplocsoporton belül genotipizáltunk egy újonnan jellemzett SNP-t, az S127-et (egyenértékű az L11-gyel), amelynek eloszlását Európában és a Közel-Keleten, az R-M269 és az R-M269(xS127) eloszlásával együtt a 2.ábra mutatja. Az R-M269 és az R-S127 eloszlása nagyjából átfedésben van, de az R-S127 gyakorisága a Balkán körül csökken, és rendkívül alacsony értékeket ér el keletebbre és Európán kívül. Ezzel szemben az R-M269 (xS127) magasabb frekvenciákat mutat a keleti populációkban. A három földrajzilag lokalizált r-S127 al-haplocsoportot (R-S21, R-S145 és R-S28) bemutató gyakorisági térképeket a 3.ábra mutatja.
ezután kiszámítottuk az egyes populációk Str sokféleségét a teljes R-M269 vonalra, valamint az R-S127 és R-M269 (xS127) al-haplocsoportokra, és megvizsgáltuk az átlagos STR variancia, valamint a hosszúság és szélesség közötti kapcsolatot, pontosan ugyanúgy, mint a Balaresque. Becsléseket adunk ezeknek az értékeknek a bizonytalanságáról az egyének bootstrapálásával, és a megfigyelt varianciaértékek mediánját és 95% – os CI-jét adjuk meg (2.ábra). Normalizáltuk a szélességet és a hosszúságot, és lineáris regressziót hajtottunk végre ezen értékek és a három R-M269 al-haplocsoport mikroszatellit varianciájának mediánja között. Nem találtunk összefüggést a szélességgel (az adatok nem szerepelnek), és a Balaresque-vel ellentétben nem találtunk szignifikáns összefüggést a hosszúság és a variancia között egyetlen haplocsoport esetében sem.
a Balaresque adatkészlet csak az SNP r-M269 felbontására mutatja be a genotípus adatait. Eredményeink azt mutatják, hogy az anatóliai R-M269 minták túlnyomó többsége, körülbelül 90 százaléka az R-M269(xS127) al-haplocsoporthoz tartozik. Ezeknek a török populációknak a Balaresque adatokból való eltávolítása és a regresszió megismétlése megszünteti a szignifikáns korrelációt (R2 = 0,23, p = 0,09; részletek az elektronikus kiegészítő anyagban és az S2 ábrán). Ezek a populációk tehát lényegesek a szignifikáns korrelációban.
megfigyeltük, hogy a Balaresque elemzésben használt ír haplotípusok nagyon alacsony STR varianciával (0,208) rendelkeztek az elemzésünkben szereplőkhöz képest (0,35; eredetileg Moore et al. ). Balaresque az online YSearch adatbázisból letöltött ír haplotípusok mintáját használta (http://www.ysearch.org). Annak tesztelése, hogy az Ysearch haplotípusok reprezentatívak voltak-e Moore ír R-M269 et al. , függetlenül újramintáztuk a Moore et al. 10 000-szeres adatkészlet, 75 haplotípus almintáinak kiválasztása, amelyekből a varianciát a Balaresque-dolgozatban használt kilenc Str segítségével becsültük meg (részletes módszertan és indoklás az elektronikus kiegészítő anyagban található). Ezeknek a 10 000 ismétlésnek a medián varianciája 0,354 volt, 95% – os CI-vel (0,285-0,432). Amikor megismételtük a regresszióanalízist ezzel a különböző varianciabecsléssel, a korreláció már nem volt szignifikáns (R2 = 0,09, p = 0,19).
a mikroszatellit alapú ASD-ről kimutatták, hogy lineárisan növekszik az idővel, és az átlagos koaleszcencia idő elfogulatlan becslőjeként használták, tekintettel arra, hogy megközelíti a 2 xhamstert . Várható lenne, hogy az Str-k különböző halmazainak használata nem változtathatja meg drámai módon a becslést T: ahogy a vállalkozók változnak, az ASD-nek hasonlóan változnia kell, T állandó marad. Az 1. táblázat a linearitás időtartamára vonatkozó becsléseket mutatja a közelmúltban becsült megfigyelt mutációs ráták és az YHRD-ből becsült tartomány alapján . Az R-S127-re vonatkozó ASD-t a két fő al-haplocsoport, az R-S21 (141 kromoszóma) és az R-S116 (717; elektronikus Kiegészítő anyag, S3 táblázat) 15 STR haplotípusának összehasonlításával számították ki. A 4a. ábra egy T-diagram (becsült érték: ASD/2), különböző jellemzőkkel rendelkező Str-k több különböző halmazára (elektronikus Kiegészítő anyag, S4 táblázat).
a T és az STR szelekció közötti összefüggés további feltárásához a T-t a fent leírt módon számítottuk ki az Y kromoszóma filogenitásának két legmélyebb ágához, az AxA1-hez és a B-hez tartozó kromoszómák alapján (4B ábra; elektronikus Kiegészítő anyag, S4 táblázat). Összehasonlításképpen, az ugyanazon STR részhalmazokból kiszámított ASD az R-S127 esetében ugyanazon a telken látható.
Vita
itt az eddigi legszélesebb körű elemzéssel megerősítettük, hogy az M269 Y kromoszóma haplocsoport térbeli eloszlása az R-S127 szerint európai és Nyugat-Eurázsiai vonalakra osztható. A Balaresque eredményeivel ellentétben nem látunk összefüggést a sokféleség és a hosszúság között (2.ábra) az R-M269 esetében. A jelenléte két populációk a Balaresque papír úgy tűnik, hogy ok-okozati a megfigyelt kapcsolat: az ír populáció alábecsült sokfélesége és a török kromoszómák felvétele, amelyek többsége potenciálisan az R-M269(xS127) nem európai kládhoz tartozik. Ha ezeket az elemeket megfelelően figyelembe vesszük, együttesen vagy önállóan, a korreláció már nem létezik. Ez az összefüggés a központi tétele annak a hipotézisnek, miszerint az R-M269 elterjedt a terjeszkedő neolit gazdálkodókkal.
Morelli et al. (a továbbiakban: Morelli) STR motívumokat talált, amelyek az R-M269-et keleti és nyugati vonalakra osztották. Ezt megfigyeltük 71 A Myres et al. Az R-M269(xS127) kromoszómák, amelyekről STR információ áll rendelkezésre, keleti motívummal rendelkeznek (DYS393-12/DYS461-10), míg Myres et al.r-S127 kromoszómáinak 80% – a. legyen a nyugati motívum (DYS393-13/DYS461-11). Egyetlen R-S127 kromoszóma sem mutatta a keleti motívumot, míg az R-M269(xS127) kromoszómák 5 százaléka a nyugati motívumot (amelyek mindegyike L23 (S141) vagy M412 (S127) származtatott). Mindkét esetben azonban ezek a motívumok abban különböztek a Morelli által javasoltaktól, hogy egy ismétléssel kevesebb volt a DYS461 lókuszon. A Morelli által a két STR motívum alapján megfigyelt dichotómiát tehát legalább részben megerősíti ennek az SNP-nek a jelenléte.
az Y kromoszóma vonalak datálása köztudottan ellentmondásos, a fő kérdés az, hogy az STR mutációs ráta megválasztása olyan életkor-becslésekhez vezethet, amelyek háromszorosával különböznek egymástól (azaz az evolúciós versus megfigyelt (genealógiai) mutációs arányok ). Érdekes módon, annak ellenére, hogy Myres et al. a Balaresque különböző STR mutációs arányokat és datálási megközelítéseket alkalmazott, a tmrca becsléseik átfedésben vannak: 8590-11 950 év, 6 mutációs rátával.Generációnként 9-10-4, illetve 4577-9063 év közötti átlagos mutációs ráta 2,3-10-3. Külön-külön Morelli kiszámította a Tmrca-t csak a szardíniai és anatóliai kromoszómák alapján, és becslése szerint az R-M269 vonal 25 000-80 700 évvel ezelőtt keletkezett) , ugyanazon evolúciós mutációs ráta alapján, mint Myres et al.
az R-S127 alcsoport átlagos összeolvadási idejének (t) becsléséhez megfelelő Str-készlet megtalálása során megmutattuk, hogy ebben az összefüggésben nem minden Str egyformán használható. A linearitás időtartamának becslésére koncentráltunk, D, különböző Str-készletek felhasználásával. Elemzéseink azt sugallják, hogy az STR D-je kulcsfontosságú a mély ősök feltárásának képességében. A linearitás időtartama azt az időtartamot jelenti a múltban, amely alatt az ASD és a T továbbra is lineárisan kapcsolódik egy adott STR-hez. Goldstein et al. kimutatták, hogy a D-t az ASD kiszámításához használt STRs két tulajdonsága befolyásolja: a mutációs ráta és az STR által felvehető lehetséges allélek tartománya. Amikor manipuláltuk az STR marker választását a(R)/2 (D helyettesítője) alapján; 1. táblázat), azt találtuk, hogy az Str-k különböző halmazai különböző értékeket adtak a T-hez.
elemzésünk megerősíti, hogy ez a jelenség nem specifikus az R-M269 haplocsoportra, sem az ASD-t használó módszerekre. A 4B ábra azt mutatja, hogy a magas D-vel rendelkező Str-k nagyobb becsléseket eredményeznek a T-ről. A BATWING használata egy HGDP populáción, amelyre 65 Y-Str áll rendelkezésre, megmutattuk, hogy a tmrca medián becslése több mint ötször eltérhet, ha az Str-ket a linearitás várható időtartama alapján választják ki (elektronikus Kiegészítő anyag, S4 ábra). Míg a kutatók figyelembe veszik az STR mutációs arányokat az ASD-vel való divergencia idő becslésekor, az általánosan használt Str-k nem rendelkeznek azokkal a specifikus tulajdonságokkal, amelyek lehetővé teszik a linearitás további feltételezését a múltban. A haplocsoportok ilyen Str-készleteken alapuló dátumainak többségét ezért szisztematikusan alábecsülhették.
következtetés
a fő R-S127 al-haplocsoportok (R-S21, R-S145 és R-S28) eloszlása markánsan lokalizált koncentrációkat mutat (3.ábra). Ha az R-M269 vonal eredete újabb, mint a neolit terjeszkedés, akkor jelenlegi eloszlásának az eredet óta bekövetkezett jelentős népességmozgások eredményének kell lennie. Ahhoz, hogy ez a haplocsoport annyira mindenütt jelen legyen, az R-S127-et hordozó népesség a neolit mezőgazdasági átmenet után kiszorította volna a Nyugat-Európában jelen lévő populációk nagy részét. Alternatív megoldásként, ha az R-S127 a neolitikum terjeszkedési hulláma előtt keletkezett, akkor vagy már Európa nagy részében jelen volt a terjeszkedés előtt, vagy a mutáció Keleten történt, és a terjeszkedés előtt vagy után terjedt el, ebben az esetben nagyobb sokféleségre számíthatunk Keleten, közelebb a mezőgazdaság eredetéhez, ami nem az, amit megfigyelünk. Az R-S127 al-haplocsoport frekvenciák térképei az R-S21, R-S145 és R-S28 esetében radiális eloszlást mutatnak meghatározott európai helyekről (3.ábra). Ezek a központok magas abszolút frekvenciákkal rendelkeznek: Az R-S21 gyakorisága Frízföldön 44%, Az R-S28 pedig az Alpokban eléri a 25%-ot; és azokban a populációkban, ahol a legmagasabb frekvenciájúak, az R-S127 túlnyomó többsége az adott alcsaládhoz tartozik. Dél-Európában például az összes R-M269 fele R-S28 eredetű, Közép-Európában pedig az R-M269 körülbelül 60 százaléka R-S21 eredetű. Az al-haplocsoport szintjén tehát az R-M269 földrajzilag lokalizált zsebekre oszlik, az egyes R-M269 al-haplocsoportok dominálnak, ami arra utal, hogy az R-M269 gyakorisága Európa-szerte összefüggésben lehet több, földrajzilag specifikus alvonal növekedésével, amelyek Európa különböző részein különböznek egymástól.
az újkőkori lelőhelyek radiokarbon-dátumainak közelmúltbeli elemzése Európa-szerte azt mutatja, hogy a neolitikum elterjedése korántsem volt állandó, és hogy számos megújult terjeszkedési központ látható Európa-szerte, amelyek a gyarmatosítás területeit képviselik, amelyek közül három érdekes módon szorosan kapcsolódik az al-haplocsoportok központjaihoz (elektronikus Kiegészítő anyag, S3 ábra). A térben explicit szimulációkat magában foglaló jövőbeli munka, az Y kromoszóma sokféleségének pontos méréseivel együtt, szükség van annak vizsgálatára, hogy az al-haplocsoportok jelenlegi eloszlása hogyan keletkezhetett. Ebben az összefüggésben az SJ Enterprises & Fran Enterprises Legutóbbi munkája elutasította az R1b-M269 paleolit diszperzióját a Balaresque adatkészletén alapuló térbeli szimulációk felhasználásával. Mindazonáltal megjegyezzük, hogy további munkára van szükség, mivel ezek a szerzők nem voltak tisztában az itt bemutatott Balaresque adatkészlet korlátozásával, és nem vizsgálták teljes mértékben a vizsgált lókuszok különböző molekuláris jellemzőinek hatását elemzésükre.
az életkorra vonatkozó becslések az Y-Str-k halmazán alapulnak, amelyeket gondosan választottak ki, hogy rendelkezzenek a mély ősök feltárásához szükséges tulajdonságokkal (például az itt nemrégiben jellemzett majdnem 200-ból), és a teljes Y kromoszóma-szekvencia-összehasonlításokból, robusztus dátumokat biztosít erre a haplocsoportra a jövőben. Egyelőre nem tudunk dátumot adni az R-M269 vagy az R-S127 életkorára vonatkozóan, de úgy gondoljuk, hogy az STR elemzéseink azt sugallják, hogy az R-M269 és az R-S116 legújabb korbecslései valószínűleg fiatalabbak, mint a valódi értékek, és az STR variancia homogenitása és az altípusok eloszlása a kontinensen nincs összhangban az R-M269 Y kromoszóma vonal neolit diffúziójának hipotézisével.