abstrakt
Ligustrum vicaryi L. er en hybrid af Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum og Ligustrum vulgale L., der tilhører familien Oleaceae. Det bruges ofte som en prydbusk på grund af dets gyldne blade. Imidlertid er dens medicinske værdi endnu ikke opdaget. For nylig har plantepolysaccharider tiltrukket omfattende opmærksomhed på grund af deres biologiske egenskaber, herunder immunmodulerende og antioksidante aktiviteter. Denne undersøgelse havde til formål at udtrække, rense og karakterisere polysaccharidet fra Ligustrum vicaryi L. frugt og undersøge dets immunmodulerende og antioksidante aktiviteter. Ligustrum vicaryi L. frugtpolysaccharid (LVFP) blev opnået ved ultralydsekstraktion, ethanoludfældning, makroporøs harpiksseparation og oprensning af dialyseposer. De fysisk-kemiske egenskaber ved LVFP blev belyst ved anvendelse af Fourier-transform infrarød spektrometri, højtydende ionkromatografiog højtydende gelfiltreringskromatografi. Resultaterne viste, at LVFP bestod af rhamnose, arabinose, galactose og glucose i et forhold på 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54, og dens molekylvægt var 88.949 da. Lvfp ‘ s immunmodulerende og antioksidante aktiviteter blev undersøgt ved anvendelse af en cyclophosphamid- (Cy-) induceret immunsupprimeret musemodel. Resultaterne viste, at lvfp signifikant øgede milt-og thymusindekserne, forbedrede den fagocytiske funktion af neutrofiler, aktiverede B-og T-lymfocytter og opregulerede serumniveauer af IL-10 og TNF-kur. Desuden observerede vi, at LVFP lindrede Cy-induceret leverskade ved at øge niveauet af superkilte-dismutase (SOD) og glutathion-peroksidase (GSH-PKS). Disse resultater tyder på, at LVFP har immunmodulerende og antioksidant aktiviteter, derfor lægge et fundament for anvendelsen af LVFP i den farmaceutiske og funktionelle fødevareindustri.
1. Introduktion
immunomodulatorer kan bruges som forebyggende eller terapeutiske strategier, der øger eller undertrykker værtsforsvarets respons. Naturlige produkter med immunmodulerende og antioksidant funktioner er almindeligt anvendt til behandling af flere sygdomme, herunder autoimmun sygdom, inflammatorisk lidelse og kræft . For nylig har der været stigende interesse for billige og mindre giftige naturlige produkter over brugen af syntetiske kemoterapeutiske midler.
Ligustrum vicaryi L. er en hybrid af Ligustrum ovalifolium Hassk. var. aureo-marginatum og Ligustrum vulgale L., der tilhører familien Oleaceae . Den præsenterer en klorofylfri fænotype og bruges i vid udstrækning som en havebrugsbusk på grund af dens gyldne blade. I henhold til gasudvekslingsegenskaberne og klorofylfluorescensresponserne kan Ligustrum vicaryi L. modstå SO2 og kan således bruges til fytostabilisering af Cd-forurenet jord . Selvom Ligustrum vicaryi L. har en høj ornamental og miljøbeskyttelsesværdi, er dets terapeutiske potentiale endnu ikke belyst.
plantepolysaccharider, en klasse af vigtige biologiske makromolekyler, der almindeligvis findes i traditionelle medicinske urter, udviser en række biologiske aktiviteter, herunder antioksidant, immunmodulerende, antiaging, antitumor og antiinflammatoriske aktiviteter . I de senere år har der været mange undersøgelser dedikeret til ekstraktion og bioaktivitetsanalyse af plantepolysaccharider. Plantefrugtpolysaccharider er de mest undersøgte, herunder jujube polysaccharider , persimmon polysaccharider og vandmelonpolysaccharider . Så vidt vi ved, er der ikke rapporteret om en undersøgelse baseret på forberedelse og bioaktivitet af Ligustrum vicaryi L. frugtpolysaccharider (LVFPs).
i denne undersøgelse blev LVFP ekstraheret og oprenset. Derefter blev molekylvægten og monosaccharidsammensætningen af LVFP analyseret. Desuden blev de biologiske funktioner af LVFP vurderet i en cyclophosphamid- (Cy-) induceret immunsupprimeret musemodel. Resultaterne viste, at LVFP har immunmodulerende evne ved at aktivere både medfødt og adaptiv immunitet. Desuden viste LVFP antioksidant aktivitet ved at øge superkildesimutase (SOD) og glutathionperoksidase (GSH-PKS). Denne undersøgelse præsenterede et teoretisk grundlag for udvikling af LVFP som et alternativt terapeutisk middel mod immunrelaterede sygdomme.
2. Materialer og metoder
2.1. Dyrevelfærd og etiske udsagn
alle eksperimentelle procedurer overholdt anbefalingerne fra ARRIVE (animal research: reporting in vivo eksperimenter) retningslinjer . Det institutionelle Udvalg for dyrepleje og brug af Jining Medical University godkendte procedurerne. Alle eksperimentelle procedurer blev udført så menneskeligt som muligt. I alt 100 sunde mandlige Kunming mus, der vejer 20-25 g, blev anbragt under betingelser, der opretholdt 12 timer af en mørk lys kunstig cyklus, med mad og vand tilgængeligt ad libitum. Dyrene blev anbragt i standard dyrerum med en temperatur på 20-22 liter C og fugtighed ved 55-60%.
2.2. Ekstraktion og oprensning af polysaccharid
Ligustrum vicaryi L. frugter blev opnået fra den botaniske have Jining Medical University (Rijao, Shandong, Kina) og identificeret af Jianan Vang (Medical Botanist, School of Pharmacy, Jining Medical University). Tørret Ligustrum vicaryi L. frugter blev pulveriseret og sigtet gennem en 40-mesh sigte. Pulveret blev nedsænket i acetone (forholdet mellem pulver og acetone var 1 : 3) og rystet i 24 timer for at fjerne lipider. Supernatanten blev kasseret, og resterne blev tørret i ovnen. Polysaccharidet blev ekstraheret med destilleret vand 8 : 1 (v/B) ved 50 liter C i 80 minutter ved anvendelse af en ultralydskraft på 250 V. Vandekstraktet blev filtreret under anvendelse af bomuld. Remanensen blev fjernet efter centrifugering ved 3000 o / min i 3 min. Dernæst blev den koncentrerede supernatant udfældet med 70% ethanol, og denne proces blev gentaget med 95% ethanol. Efter at supernatanten blev fjernet, blev destilleret vand tilsat for at opløse ekstraktet, og resten blev fjernet ved centrifugering. DM101 makroporøs harpiks blev brugt til at fjerne pigmentet. Sevage-reagenset (chloroform/1-butanol, v/v = 4 : 1) blev anvendt til at fjerne proteinet, indtil der ikke blev observeret nogen misfarvningsreaktion ved anvendelse af Coomassie Brilliant Blue G-250 detektion. Polysacchariderne blev anbragt i en frysetørrer i 24 timer for at opnå det frosne pulver. De små molekyler i polysaccharidet blev fjernet ved hjælp af en dialysepose (molekylær afskæring på 3500 Da) i to dage, og destilleret vand blev udskiftet hver 12. time. Anthron-svovlsyreanalysen med en glukosestandardkurve blev brugt til at bestemme renheden af LVFP.
2.3. Fourier-Transform infrarød (FTIR) analyse
LVFP blev blandet med rent kaliumbromidpulver, og blandingen blev anbragt i en agatmørtel og formalet ensartet under en infrarød lampe. Blandingen blev vurderet under anvendelse af Fourier-transform infrarødt spektrometer IRTracer-100 (Shimadsu, Japan).
2.4. Højtydende Ionkromatografi (HPIC)
til HPIC-analyse blev 5 mg LVFP opløst i 1 mL 2 mol/L trifluoreddikesyre og anbragt ved 121 liter C i 2 timer til hydrolyse. Derefter blev blandingen filtreret under anvendelse af en 0,45 liter mikroporøs filtreringsmembran. Den kromatografiske adskillelse af monosaccharider blev udført på ICS-5000 ionkromatograf udstyret med en CarboPac PA20-søjle og pulsampere-detektor. Ionkromatografiseparationsbetingelserne blev justeret og testet for en blanding af otte monosaccharidstandarder (fucose, rhamnose, arabinose, galactose, glucose, mannose, og fructose). En overlegen adskillelse blev opnået ved gradient eluering med en konstant strømningshastighed på 0,5 mL/min. Den mobile fase bestod af 250 mM NaOH (a), vand (indeholdende 1 M NaAc%, v/v, B) og vand (C). Elueringen blev udført som følger: 2.0% A ved 0 liter 21 min; 2,0% A og 5,0% B ved 21,1 min; 2,0% A og 20% B ved 21,1 liter 30 min; og 80% A ved 30,1 liter 50 min.
2.5. Højtydende Gelfiltreringskromatografi (HPGFC)
polysaccharidmolekylmassen blev analyseret af HPGFC (vand, Ny York, USA) og udstyret med RID (2414 brydningsindeks detektor) og styrke 3 arbejdsstation. De kromatografiske forhold var som følger: kromatografisk søjle: Ultrahydrogel-kur lineær, 300 mm-kur 7,8 mm-kur 2, mobil fase: 0,1 M NaNO3, strømningshastighed: 0,9 mL / min og søjletemperatur: 45-kur C. Prøven blev opløst i den flydende fase og filtreret af en mikroporøs filtreringsmembran. Molekylvægtstandarder anvendt til kalibreringskurven var MV135350, MV36800, MV9750, MV2700OG MV180.
2.6. Cyclophosphamid – (Cy -) induceret immunsuppressiv musemodel og Lvfp-Administration
i alt 100 mus blev tilfældigt opdelt i fem grupper: kontrol, Cy, Cy + LVFP (100 mg/kg/dag), Cy + LVFP (200 mg/kg/dag) og Cy + LVFP (400 mg/kg/dag). Kontrolgruppen blev administreret normal saltvand, og de andre fire grupper blev intraperitonealt injiceret med Cy (40 mg/kg) hver dag i syv dage. LVFP blev administreret ved intragastrisk administration i syv på hinanden følgende dage.
2.7. Bestemmelse af milt-og Thymusindekser
alle mus blev vejet og ofret 24 timer efter den sidste lægemiddeladministration. Milten og thymus blev udskåret og vejet. Milt-eller thymusindekset blev udtrykt som forholdet mellem milt-eller thymusvægt og kropsvægt.
2.8. Bestemmelse af den fagocytiske funktion af musens neutrofiler
Staphylococcus aureus blev anvendt til at vurdere fagocytosen af neutrofiler. Kort sagt blev 40 liter blod opnået fra mus efter lvfp-administration og anbragt i et heparinrør for at forhindre koagulation. Dernæst blev der tilsat 40 liter bakteriel suspension til det ovennævnte rør. Blandingen blev jævnt overtrukket på glasrutschebaner og opretholdt ved stuetemperatur i 0,5 h. derefter fikseres blandingen med 2-3 dråber methanol i 5 minutter og farves med 4-5 dråber Vrighs plet i 5 minutter. I alt 100 neutrofiler blev observeret og registreret. Den neutrofile fagocytiske hastighed og det neutrofile fagocytiske indeks blev beregnet som følger: den neutrofile fagocytiske hastighed = antallet af neutrofiler, der viste fagocytisk funktion/det samlede antal neutrofiler og det neutrofile fagocytiske indeks = det samlede antal bakterier, der var blevet opslugt af neutrofiler/det samlede antal neutrofiler.
2.9. Bestemmelse af Serumhemolysin ved ELISA
på den fjerde dag blev 5% af en kyllingerød blodlegemsuspension (CRBC) injiceret intraperitonealt i musene (0, 1 mL/10 g). På den syvende Dag, 2 timer efter lvfp-administration, blev 1 mL museblod opnået og centrifugeret i 10 minutter. Derefter blev 40 liter serum tilsat til 2 mL normal saltvand. En mL 10% marsvinserum og 1 mL 5% CRBC-suspension blev tilsat til serumet efterfulgt af inkubation i et vandbad ved 37 liter C i 0,5 h. blandingen blev centrifugeret, og supernatanten blev anbragt i en 96-brønds kulturplade. Den tilsvarende optiske densitetsværdi blev detekteret af Thermo Scientific Multiskan Mk3 Mark instrument (Valtham, MA, USA).
2.10. Bestemmelse af T-Lymfocyttransformationshastighed
på den anden dag blev musene injiceret intramuskulært 8 mg/kg phytohemagglutinin (PHA). På den syvende Dag, 2 timer efter lvfp-administration, blev 40 liter blod opsamlet fra den retroorbitale sinus, anbragt på et dias og farvet med 4-5 dråber Vrighs plet. Det overskydende farvestof blev skyllet med vand efter 20 minutter. Ved anvendelse af et mikroskop blev 100 celler observeret. De transformerede lymfocytter blev beregnet som følger: lymfocyttransformationshastighed = transformerede lymfocytter/totalt antal lymfocytter.
2.11. Forsinket overfølsomhed (DTH) respons
DTH respons blev undersøgt af graden af øre hævelse. Generelt antages graden af øre hævelse at afspejle graden af betændelse . DTH-respons blev målt som følger: på den anden dag blev 1 cm2 abdominalt hår fjernet ved anvendelse af Na2S, og mavehuden blev dækket med 25 liter 1-fluor-2,4-DINITROBENSENOPLØSNING (DNFB). På den sjette dag blev huden på højre øre overtrukket med 20 liter DNFB-opløsning. På den syvende Dag, 2 timer efter lvfp-administrationen, blev musene ofret, og de to ører blev udskåret og vejet. Vægtforskellen mellem de to ører bestemte graden af øre hævelse.
2.12. Detektion af TNF-Kurt og IL-10 cytokiner i Serum
på den syvende Dag, 2 timer efter administration af lvfp, blev musens blod opnået ved anvendelse af en retroorbital sinuspunktur og koaguleret naturligt i 15 minutter ved stuetemperatur. Derefter blev blodet centrifugeret i 20 minutter, og supernatanten blev opsamlet. TNF-Kurt og IL-10 i supernatanten blev påvist ved hjælp af ELISA-sæt (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina).
2.13. På den ottende dag blev musene ofret,og leverene blev ekstraheret. Efter slibning og centrifugering blev supernatanten af levervæv opsamlet til påvisning af SOD, GSH-PKS og MDA. Der blev målt ved hjælp af ELISA-sæt (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Kina).
2.14. Hæmatoksylin og eosin (he) farvning
he farvning blev udført som tidligere rapporteret . På den ottende dag blev musene ofret, og levervæv blev ekstraheret og fikseret i 10% neutral-bufret formalin. Efter indlejring i paraffin blev vævene skåret i 5 liter sektioner. Derefter blev lysbillederne farvet med HE for at bestemme morfologiske ændringer. Billeder blev fotograferet under et lysmikroskop (Olympus, Tokyo, Japan).
2.15. Statistisk analyse
eksperimentelle forsøgspersoner/præparater blev tilfældigt tildelt grupper, og der blev opnået lige gruppestørrelser. Gruppeopgaver, dataregistrering og dataanalyse blev ikke videregivet til efterforskeren. Data er vist som middelværdien af den gennemsnitlige sd fra mindst fem uafhængige eksperimenter. Envejs ANOVA ledsaget af Tukeys multiple-sammenligningstest blev brugt til flere sammenligninger ved hjælp af GraphPad Prism version 6.0 (GraphPad-program, La Jolla, CA, USA) og blev betragtet som statistisk signifikant.
3. Resultater
3.1. FTIR-spektrumanalyse af lvfp
LVFP blev ekstraheret ved lipidfjernelse via acetone, varmt vand kombineret med ultralydsekstraktion, ethanoludfældning, pigmentfjernelse med makroporøs harpiks, deproteination med Sevage-reagenset og lille molekylfjernelse med henholdsvis en dialysepose. Desuden blev den nye polysaccharidstruktur karakteriseret ved infrarød spektroskopi. FTIR-spektrumanalysen af LVFP er vist i Figur 1(a). Den karakteristiske brede top ved 3345 cm−1 svarede til O-H (måske inklusive N-H) strækningsvibrationer. Absorptionstoppen ved 2929 cm−1 svarede til C-H-strækningsvibrationsabsorptionstoppen og sukkerabsorptionstoppen. Absorptionen ved 1599 cm−1 angav bøjningsvibrationstilstandene for-OH. Toppen ved 1412 cm−1 skyldtes tilstedeværelsen af C-H bøjningsvibrationer. Desuden indikerede absorptionerne ved 1073 cm−1 bøjningsvibrationstilstandene for C-O-strækning i den alkoholiske hydroksylgruppeform.
3.2. Monosaccharidsammensætning af LVFP
MONOSACCHARIDSAMMENSÆTNINGERNE af LVFP blev analyseret af HPIC. Som vist i Figur 1(b) og 1 (c) blev alle monosaccharider, der eksisterede i polysaccharider, identificeret i henhold til elueringstiden for monosaccharidstandarderne med henvisning til en standardkurve. LVFP var hovedsageligt sammensat af rhamnose, arabinose, galactoseog glukose i molforholdet 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.
3.3. Bestemmelse af molekylvægt af LVFP ved HPGFC
molekylvægten af LVFP blev detekteret af HPGFC. Dekstrans (molekylvægt: 180, 2700, 9750, 368000 og 135350 Da) blev anvendt som standarder, da de er vandopløselige og tilgængelige i en lang række molekylmasser. Standarderne indeholdt retningslinjer for estimering af størrelsen på LVFP. En standardkurve blev opnået (y = -0,523 * + 13,01, R2 = 0,995). Resultaterne viste, at molekylvægten af lvfp var 88.949 Da.
3.4. Virkninger af LVFP på Thymus-og Miltindekser hos cy-inducerede immunsuppressive mus
den Cy-inducerede immunsupprimerede musemodel blev etableret for at undersøge den immunmodulerende aktivitet af LVFP. Cy blev administreret som en intraperitoneal injektion (40 mg/kg) hver dag i syv dage. Efter fem dages cy-administration udviste musene symptomer som hårtab, lav spænding, aggression, dårlig appetit og vægttab, mens der ikke blev observeret nogen åbenbar ændring i kontrolgruppen, hvilket indikerer, at dyremodellen blev etableret med succes. Cy + lvfp-grupper blev administreret forskellige koncentrationer af LVFP (100, 200 og 400 mg/kg/dag) i syv på hinanden følgende dage. Milt-og thymusindekser afspejler organismens immunfunktioner . Lvfp-virkningerne på thymus-og miltindekserne i de cy-inducerede immunsuppressive mus er vist i figur 2. Sammenlignet med kontrolgruppen viste Cy-gruppen et signifikant fald i thymus-og miltindekser. Lvfp-administration øgede disse indekser signifikant på en dosisafhængig måde. Disse resultater antydede, at LVFP kunne påvirke immunorganerne for at forbedre immuniteten.
(a)
(b)
(a)
(b)
3.5. Effekter af LVFP på neutrofil fagocytose hos cy-inducerede immunsuppressive mus
neutrofiler er et effektivt forsvar mod invaderende mikroorganismer . Fagocytose er en nøglestrategi for neutrofiler til at dræbe patogener . Den fagocytiske hastighed og fagocytiske indeks blev undersøgt for at undersøge aktiveringen af neutrofiler . Som vist i figur 3 havde Cy-gruppen sammenlignet med kontrolgruppen signifikant reduceret fagocytisk hastighed og fagocytisk indeks, hvilket tyder på en immunsuppressiv status. Administration af lvfp (200 mg/kg og 400 mg/kg) lindrede signifikant disse ændringer. Disse resultater antydede, at LVFP kan forbedre den fagocytiske funktion af neutrofiler.
(a)
(b)
(a)
(b)
3.6. Virkninger af LVFP på Humoral immunitet og cellulær immunitet hos Cy-inducerede immunsuppressive mus
Humoral immunitet er kritisk for kroppen til at bekæmpe tumorer og infektioner. Serumhæmolysinniveauet kan bruges til at evaluere det humorale immunrespons . Serumhemolysinet blev reduceret ved Cy-behandling, og denne ændring blev signifikant svækket af LVFP på en dosisafhængig måde (figur 4(A)). En række antigener fra blod kan aktivere T-lymfocytter. PHA kan fungere som et mitogen for at udløse aktivering og proliferation af T-celler . T-lymfocyttransformationsanalysen blev udført under anvendelse af museblod efter PHA-stimulering i nærvær eller fravær af LVFP. Som vist i figur 4(b) hæmmede alle tre doser af LVFP markant den Cy-inducerede reduktion af T-lymfocyttransformationshastigheden. DTH-responset er et T-cellemedieret immunrespons . DTH-responset blev vurderet ved at måle graden af hævelse i øret. Alle tre doser af lvfp svækkede markant Cy-induceret hæmning i øre hævelse grad (figur 4(c)). Disse resultater antydede, at LVFP kan aktivere B-og T-lymfocytter.
(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
3.7. Virkninger af LVFP på ekspressionen af IL-10 og TNF-kur i Serum af Cy-inducerede immunsuppressive mus
cytokiner udskilt af immunceller spiller vitale roller i værtsforsvar . IL-10 og TNF-karrus er vigtige inflammatoriske mediatorer . ELISA blev udført for at fastslå virkningerne af LVFP på serumekspressionen af IL-10 og TNF-kurr. Vores resultater viste, at IL-10-og TNF-Krust-udtrykkene efter Cy-behandling blev signifikant reduceret. Administration af lvfp dosisafhængigt øgede IL – 10-og TNF-oprensningsniveauer (figur 5).
(a)
(b)
(a)
(b)
3.8. Virkninger af LVFP på Oksidativ Stress hos Cy-inducerede immunsuppressive mus
desuden undersøgte denne undersøgelse, om LVFP lindrede Cy-induceret oksidativ stress og leverskade. SOD omdanner superilte-anionen til H2O2 og O2 for at forhindre og neutralisere den frie radikalinducerede skade . Det antages at være et vigtigt endogent forsvar mod peroksidativ ødelæggelse af den cellulære membran . MDA er det endelige produkt af lipid peroksidation og kan afspejle den iltning skader i leveren væv . Figur 6(a)-6 (c) viser de signifikant nedsatte SOD-og GSH-PKS-udtryk med øgede MDA-niveauer i levervævet efter Cy-behandling. Administration af LVFP-dosisafhængigt øgede SOD-og GSH-PKS-niveauerne og nedsatte MDA-niveauet. Dernæst blev ændringerne i levermorfologi vurderet ved hjælp af HE-farvning. Som vist i figur 6 (d) var levercellerne i Cy-gruppen sparsomme og uordnede med den pyknotiske kerne. De hepatiske sinusoider var fulde af røde blodlegemer. Som forventet blev levercellerne i lvfp-gruppen arrangeret på en ordnet måde med en klar nukleolus, sammenlignelig med dem i kontrolgruppen. Resultaterne viste, at LVFP kunne dæmpe den oksidative stress og leverskade induceret af Cy.
(a)
(b)
(c)
(d)
(a)
(b)
(c)
(d)
4. Diskussion
i denne undersøgelse blev et polysaccharid ekstraheret fra Ligustrum vicaryi L. frugt, og dets immunmodulerende og antioksidante aktiviteter blev vurderet. Polysaccharidet blev ekstraheret med varmt vand kombineret med ultralydsekstraktion, ethanoludfældning, fedtfjernelse ved acetone, pigmentfjernelse ved dm101 makroporøs harpiks, deproteination med Sevage-reagenset (chloroform/1-butanol, v/v = 4 : 1) og fjernelse af lille molekyle ved hjælp af henholdsvis dialyseposen. Desuden blev denne polysaccharidstruktur karakteriseret ved infrarød spektroskopi, HPGFC-RID og HPIC. Resultaterne viste, at molekylvægten af LVFP er 88.949 da, og LVFP består af fire monosaccharider, nemlig rhamnose, arabinose, galactose og glucose i molforholdet 1,79 : 7,55 : 4,58 : 1,54.
immunsuppression er en tilstand af midlertidig eller permanent immundysfunktion og kan gøre en organisme mere følsom over for patogener. Udvikling af nye immunmodulerende midler er en af de mest effektive metoder til forebyggelse og behandling af immunsuppressive sygdomme . For eksempel synes immunmodulerende midler kombineret med kemoterapimedicin at være nyttige i kræftbehandling . Flere rapporter har indikeret positive korrelationer mellem de immunmodulerende handlinger og polysaccharider. Ayeka et al. viste, at lakrids (Glycyrrhisa uralensis Fisch.) polysaccharid har immunmodulerende virkninger, der er tydelige ved aktivering af CD4+ og CD8+ immuncellepopulationer og øget produktion af forskellige cytokiner, såsom IL-2, IL-6 og IL-7 . Chen et al. isolerede polysaccharider fra Schisandra sphenanthera og Schisandra chinensis; disse ekstrakter kan forbedre den fagocytiske aktivitet af makrofager og forbedre kroppens immunitet . Efter sigende blev det observeret, at polysacchariderne fra Schisandra sphenanthera og Schisandra chinensis hovedsageligt var sammensat af arabinose, glukose og galactose, svarende til sammensætningen af lvfp. For at undersøge, om LVFP havde immunmodulerende funktioner, blev der etableret en Cy-induceret immunsupprimeret musemodel. Cy er et kemoterapeutisk middel og er blevet brugt til at etablere immunsuppressive dyremodeller . På niveau med immunorganer indikerede resultaterne, at LVFP signifikant øgede milt-og thymusindekser hos Cy-inducerede immunsuppressive mus. På niveauet af immunceller blev det observeret, at LVFP forbedrede den fagocytiske funktion af neutrofiler og fremmede B-og T-lymfocytaktivering. Disse data indikerer, at LVFP kan forbedre både medfødt og adaptiv immunitet.
desuden blev immunrelaterede cytokiner i serum også undersøgt, og resultaterne indikerede, at LVFP øgede IL-10 og TNF-oprensningsniveauer. Efter sigende kan flere typer polysaccharider påvirke ekspressionen af inflammatoriske faktorer. Chen et al. observeret, at sulfaterede polysaccharider fra filamentøse mikroalger Tribonema sp. kan forbedre IL-6, IL-10 og TNF-kurp udtryk i makrofager . Cheng et al. rapporterede, at polysaccharider fra den vilde Lactarius deliciosus øgede sekretionen af TNF-kur, IL-1-kur og IL-6 i makrofager . Et al. rapporterede, at polysaccharidet fra lichen Umbilicaria esculenta inducerede frigivelsen af TNF-Lenin, IFN-Lenin, IL-1 Lenin, IL-6 og IL-10 i murine makrofager .
antioksidanter er stoffer, der undertrykker iltning i menneskekroppen. Normalt er der en balance mellem produktion af reaktive iltarter og antioksidantforsvarssystem, hvilket er uundværligt ved normal metabolisme. Celler producerer nogle endogene antioksidanter såsom SOD og GSH-PKS for at undertrykke overdreven frie radikaler . Denne undersøgelse bestemte den antioksidante aktivitet af LVFP i Cy-inducerede immunsuppressive mus. Resultaterne viste, at LVFP udviste en signifikant stigning i SOD-og GSH-PKS-udtryk. Desuden reducerede LVFP MDA-ekspression, hvilket er tegn på oksidativ skade i leveren. Han farvning indikerede, at LVFP kan lindre levercelleskader induceret af Cy. Det kan således konkluderes, at LVFP kan beskytte celler mod stress-induceret skade ved at øge produktionen af antioksidanter såsom SOD og GSH-PKS. Tidligere forskning har vist, at indholdet af rhamnose, arabinose og galactose i monosaccharidsammensætningen kan påvirke den antioksidante aktivitet . Indholdet af rhamnose, arabinose og galactose i lvfp er højere, hvilket kan være vigtigt for den stærkere antioksidant aktivitet demonstreret af LVFP.
samlet set blev polysaccharider fra Ligustrum vicaryi L.-frugten ekstraheret, og deres fysiske og biologiske egenskaber blev undersøgt. LVFP kunne undersøges som et potentielt immunmodulerende og antioksidant middel til terapeutisk anvendelse i immunsuppressive sygdomme, hvilket muliggør introduktion af traditionel kinesisk medicin til det internationale marked.
5. Konklusioner
som konklusion blev LVFP ekstraheret og oprenset fra Ligustrum vicaryi L.-frugten med en molekylvægt på 88.949 da og bestod af fire monosaccharider, nemlig rhamnose, arabinose, galactose og glucose. Foreløbige farmakologiske undersøgelser viste, at lvfp effektivt kunne forbedre immunfunktionerne og havde antioksidant aktivitet. Denne undersøgelse viser, at LVFP kan være et lovende immunmodulerende og antioksidant middel til farmaceutiske terapier (Figur 7).
datatilgængelighed
TIF-dataene, der bruges til at understøtte resultaterne af denne undersøgelse, er tilgængelige fra den tilsvarende forfatter efter anmodning.
interessekonflikter
forfatterne erklærer, at der ikke er nogen interessekonflikter vedrørende offentliggørelsen af dette papir.
anerkendelser
dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (81800399), Jining Medical University Doctoral Research Startup Fund, Fonden for National-niveau universitetsstuderende’ Innovation og Entrepreneurship Training Project (201610443011), Shandong Traditional Chinese Medicine Science and Technology Development Program (2019-0450) og Jining Medical University Student Innovation Training Program (Jining Medical University) 2016011/2019092).